RESUMO

A disposição final e tratamento dos resíduos sólidos gerados em grandes centros urbanos são problemas atuais que, se não conduzidos de forma correta, podem acarretar em graves impactos ambientais. A decomposição biológica, química e física de resíduos sólidos produz um líquido escuro e poluente conhecido como lixiviado. Uma das alternativas de degradação desse resíduo é a digestão anaeróbia, processo de degradação biológica realizada por microrganismos em anaerobiose. Os produtos finais da decomposição são o dióxido de carbono, a água e o metano, sendo este utilizado como fonte alternativa de geração de energia. A degradação biológica da digestão anaeróbia ocorre por relações mutualísticas, ou seja, vários estágios bioquímicos consecutivos, cada qual realizado por diferentes grupos de microrganismos específicos e vinculados. O presente estudo tem enfoque na metanogênese, etapa final do processo de degradação anaeróbia, realizada pelas arqueas metanogênicas acetoclásticas e hidrogenotróficas. O objetivo dessa pesquisa é identificar, por técnicas de biologia molecular, microrganismos metanogênicos presentes em amostras de lodo do fundo anaeróbio da lagoa facultativa do Aterro Sanitário de Curitiba. Após cultivo em meio nutriente específico para metanogênicos, o DNA total é extraído das colônias obtidas e então amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase, utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores (primers) universais baseados nas sequências de DNA ribossomal metanogênico (rDNA 16S). Ao todo, quatro pares de primers são utilizados, com as seguintes especificidades: a) domínio Archaea; b) ordem Methanobacteriales; c) ordem Methanosarcinales; e d) ordem Methanomicrobiales. A amplificação do DNA é conduzida em equipamento termociclador modelo Termocycler, marca Biosystems, com as seguintes condições: 95°C por 10 minutos, seguido de 30 ciclos de 95°C por 1 minuto, 60°C por 1 minuto e 72°C por 1 minuto. Os resultados preliminares indicam que a extração do DNA dos metanogênicos tem sido a etapa limitante da análise molecular das amostras cultivadas. Isso porque existem poucos protocolos para extração de DNA de microrganismos metanogênicos, sendo que a maioria destina-se a Escherichia coli. Os protocolos adaptados de métodos de extração de DNA de E. coli não forneceram rendimento adequado de DNA metanogênico durante esse estudo. Dessa forma, novos testes, utilizando-se diferentes protocolos de extração estão sendo avaliados na etapa atual da pesquisa, visando obter DNA metanogênico com pureza e rendimento adequado.

Palavras-chave: DNA Metanogênico, Lixiviado de Aterro Sanitário, Lodo Anaeróbio