RESUMO

Bactérias do gênero Aeromonas podem causar um amplo espectro de doenças em humanos, mas não são pesquisadas rotineiramente nos laboratórios clínicos. Isto pode ser devido ao fato de que ainda são pouco conhecidas em nosso meio e das dificuldades para a sua identificação ao nível de espécie. Técnicas moleculares têm sido aplicadas para a identificação das espécies de Aeromonas utilizando como alvo genes essenciais como 16S rRNA e/ou gyrB. Os objetivos deste trabalho são identificar estirpes de Aeromonas utilizando o sequenciamento do gene gyrB e comparar com os resultados da identificação bioquímica convencional. Foram analisadas 14 estirpes de Aeromonas, previamente isoladas e identificadas utilizando métodos microbiológicos convencionais. As bactérias foram cultivadas em ágar MacConkey (36±1°C, 18 horas) e as colônias utilizadas para extrair DNA pelo método da fervura. O gene gyrB foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando iniciadores específicos. Aproximadamente 100 ng dos produtos de PCR foram utilizados nas reações de sequenciamento realizadas com o BigDye Terminator Cycle Sequencing kit e o ABI Prism 377 DNA Sequencer (AppliedBiosystems). Os resultados foram analisados com os programas BioEdit, BLAST e ClustalW. Foram obtidas sequências de aproximadamente 900 pares de bases (pb) do gene gyrB para cada uma das estirpes analisadas. Através da comparação das sequências com aquelas do banco de dados GenBank utilizando o BLASTn, as bactérias foram identificadas como A. hydrophila (5), A. caviae (4), A. veronii (2), A. media (2) e A. aquariorum (1). De acordo com os testes bioquímicos recomendados para a identificação de Aeromonas, as estirpes foram identificadas como A. hydrophila (4), A. caviae (5), A. veronii (2) e 3 como Aeromonas spp. Houve discordância entre a identificação bioquímica e a molecular de parte das estirpes analisadas. Isso mostra a dificuldade na identificação bioquímica de Aeromonas ao nível de espécie, o que é devido à diversidade bioquímica e às reações atípicas apresentadas por estas bactérias. Através do sequenciamento foi possível identificar todas as estirpes ao nível de espécie. Como o uso das metodologias moleculares está se tornando mais comum nos laboratórios clínicos, sugerimos que o sequenciamento do gene gyrB seja adotado como referência para a identificação de Aeromonas.

Palavras-chave: Aeromonas, gyrB, Sequenciamento