RESUMO

O gênero Herbaspirillum é composto atualmente por 14 espécies descritas, isoladas de diferentes ambientes (endofítico, rizosfera, água e solo) e localizações geográficas (Brasil, Europa, Coreia, Japão e Ilhas Canárias), e é conhecido principalmente por conter bactérias diazotróficas capazes de assimilar o nitrogênio atmosférico através de um processo denominado Fixação Biológica de Nitrogênio (FBN). Algumas espécies podem ser encontradas associadas a diversos grupos de plantas, principalmente gramíneas, promovendo seu crescimento. O gênero inclui ainda bactérias não fixadoras que apresentam grande diversidade ecológica e fisiológica (ex., fixação de carbono, degradação de compostos fenólicos, produção de fitormônios) e também isolados clínicos associados a pacientes com fibrose cística. Entretanto, pouco é conhecido a respeito das espécies além de H. seropedicae e da sua capacidade de associação a plantas e seu potencial biotecnológico como promotora do crescimento vegetal. Neste trabalho estão sendo realizadas marcações de diferentes espécies do gênero (H. seropedicae, H. huttiense subsp. huttiense, H. huttiense subsp. putei e H. autotrophicum) com o gene repórter gfp para posterior ensaio das bactérias marcadas em plantas de milho (Zea mays) e arroz (Oryza sativa) a fim de determinar a capacidade de colonização das diferentes espécies. O plasmídeo pHRGFPTC, contendo o gene repórter gfp e de resistência aos antibióticos tetraciclina (Tc) e cloranfenicol (cat) foi mantido em Escherichia coli S17 ?-pir e introduzido nas estirpes de Herbaspirillum por conjugação. As quatro estirpes de Herbaspirillum foram crescidas meio de cultura NFbHP com malato como fonte de carbono e a E. coli contendo o plasmídeo foi crescida em meio de cultura Luria-Broth (LB). Após o crescimento, foram misturados e plaqueados em placas contendo meio sólido NFbHP com malato e meio LA e incubadas a 30ºC overnight. A gota de cada placa foi ressuspendida e plaqueada em meio sólido NFbHP com malato contendo antibiótico tetraciclina. Todas as estirpes transformadas apresentaram resistência ao antibiótico Tc e os testes para verificação da marcação serão realizados posteriormente através de microscopia de fluorescência. A marcação das estirpes será útil para facilitar a visualização nos testes de colonização epifítica e endofítica, que serão realizados inoculando-se as bactérias do gênero marcadas em plantas de milho e arroz.

Palavras-chave: Herbaspirillum, gfp, associação com planta