RESUMO

A metilação do DNA é, entre o maquinário epigenético, uma importante forma de regular a expressão dos genes envolvidos na diferenciação Th1/ Th2. Durante essa diferenciação há uma diminuição nos níveis de metilação das ilhas CpG de genes como IL13 durante a polarização para Th2. A análise de metilação global do genoma em amostras de rinite alérgica e controles sadios indicou diferenças, possibilitando extrapolar estes resultados para regiões mais específicas, como as ilhas CpG do gene IL13. Além disso, essas regiões podem estar diferencialmente metiladas nas populações de linfócitos T auxiliadores efetores de memória (CD45RO+), caracterizadas por permanecer no organismo mesmo após a eliminação do agente agressor, em pacientes com rinite alérgica quando comparadas com as demais células do mesmo grupo de indivíduos e com indivíduos controles sadios. No Brasil, especialmente no Sul, são observados dois tipos de rinite alérgica: a perene, provocada principalmente por ácaros do gênero Dermatophagoide (Dp) presentes na poeira doméstica, e a sazonal, decorrente do pólen de gramíneas como o Lolium. O gene IL13 possui duas ilhas CpG, a ilha 1 com 266 pb e a ilha 2 com 717 pb. A estratégia para analisar a ilha 2 foi dividi-la em duas partes delimitadas pelos iniciadores designados CD e EF. As amostras dos pacientes e dos controles sadios foram obtidas pela coleta de 10 ml de sangue periférico, após teste cutâneo de sensibilização aos alérgenos Dp e Lolium. Os leucócitos mononucleares obtidos por gradiente de densidade foram submetidos à separação magnética para isolamento das células CD45RO+ das demais células, empregando o kit de separação Miltenyi Biotec, sendo que a pureza das células isoladas foi determinada por citometria de fluxo. A extração do DNA foi realizada com o QIAamp DNA Mini Blood kit. Para verificar a metilação na ilha 2 na região CD realizou-se a técnica de restrição utilizando uma endonuclease sensível à metilação (BstUI), seguida de uma reação em cadeia da polimerase (PCR). As amplificações dos produtos da PCR foram visualizadas a partir de eletroforese em gel de poliacrilamida 8% (90 V por 90 minutos). Os resultados mostraram que as amostras controle não amplificaram após a restrição, indicando que os CGs analisados não estavam metilados. Já as amostras dos pacientes apresentaram produto amplificado, indicando metilação dos CGs. Esses resultados indicam previamente que a região delimitada pelos CD pode não ser a principal região do gene IL13 responsável pelo controle de sua expressão, uma vez que nos pacientes há um aumento nos níveis de IL-13.

Palavras-chave: Linfócitos T de memória, IL13, Rinite alérgica