RESUMO

Rhizobium sp. NGR234 é uma estirpe capaz de nodular 112 espécies de plantas da família Fabaceae, tornando-se um dos principais organismos de estudo dos mecanismos que controlam a interação simbiótica entre as bactérias noduladoras e as leguminosas. Essa interação simbiótica é determinada e controlada pelos dois organismos simbiontes, por meio de moléculas sinalizadoras, cujos níveis são finamente regulados. Os genes envolvidos na nodulação, secreção de proteínas e produção de lipo-polissacarídeos são conhecidos em NGR234, e são regulados pelos ativadores transcricionais NodD1, NodD2, SyrM1, SyrM2 e Ttsl. No entanto, outro par regulatório com função desconhecida é composto pelo NodV e NodW. Os genes codificadores deste par regulatório de dois componentes, nodV e nodW, formam um único operon, e podem ser reguladores adicionais do processo de nodulação. Portanto, o estudo tem por objetivo analisar a função do par regulatório NodVW por meio de mutagênese e análise fenotípica. As estirpes selvagem, nodVW-, nodD1/nodVWe nodD2/NodVWserão utilizadas como receptoras de regiões regulatórias (NB6, nopB, nopJ e rmlB) de potenciais genes alvo, com o objetivo de detectar quais dessas é regulada por este par regulatório. Para analisar o perfil de expressão destes genes, as suas regiões promotoras foram clonadas a montante do gene que codifica para a proteína fluorescente verde (GFP) e as fusões transcricionais resultantes foram testadas com e sem indução de mix de flavonoides, após 0, 24, 48, 72 e 96 horas. Os resultados preliminares provenientes de três experimentos independentes mostram que todas as regiões escolhidas são reguladas por NodVW. A região regulatória NB6, que controla a expressão do gene fixF, é fortemente dependente de NodVW, visto que os níveis de GFP observados nesta fusão são semelhantes aos níveis basais (sem indução com flavonóides). Os genes nopB e nopJ codificam para as proteínas NopB e NopJ, respectivamente, que são proteínas importantes para a nodulação. Estes genes exibiram menor expressão na estirpe NGR234?nodVW-, sugerindo que este par regulatório modula sua expressão, mas não é essencial. Por último, o gene rmlB, que está envolvido com a síntese de lipo-polissacarídeos ricos em ramnose, também parece ser regulado pelo par NodVW, pois os níveis de expressão de GFP para este mutante são menores que os níveis da estirpe selvagem. Estes resultados sugerem que par regulatório NodVW é importante para a regulação do processo de nodulação. Os ensaios de nodulação (em andamento) devem confirmar os resultados obtidos até o momento.

Palavras-chave: NGR234, NodVW, reguladores transcricionais