RESUMO

Os fungos, como organismos heterótrofos, se caracterizam pela ampla e diversa produção e liberação de enzimas ao meio externo. Através destas torna-se possível o acesso do organismo a fontes de carbono e nitrogênio para o seu metabolismo basal. A existência, dentro da indústria, de uma tendência para a substituição de processos de caráter inorgânico ou sintético por outros de origem biológico abre uma brecha para a aplicação de enzimas em tais processos. Assim, de maneira crescente pode se observar a aplicação de enzimas na indústria de alimentos, do papel, de cosméticos, na biodegradação de resíduos, entre outras. O presente trabalho tem como objetivo final a expressão e caracterização do maior numero de proteínas secretadas por duas linhagens de fungos (uma lignolítica e outra endofitica) com propriedades associadas a biodegradação de poluentes. Para tal os fungos foram cultivados em meio mínimo sólido e líquido variando pontualmente o tipo e concentração de 6 fontes de carbono e nitrogênio. As fontes de carbono usadas foram: amido, carboximetilcelulose, sacarose, glicose, maltose e glicerol, em concentrações de 1, 5 e 20 g/L. As fontes de nitrogênio empregadas foram uréia, cloreto de amônia, tartarato de amônia, oxalato de amônia e nitrato de sódio, em concentrações entre 1 e 25 mM. Extratos solúveis foram isolados e analisados por eletroforese desnaturante SDS-PAGE, seguida de coloração de prata. A biomassa resultante foi desidratada em estufa e quantificada. De maneira geral a biomassa aumentou de forma proporcional ao teor de carbono presente no meio de cultivo. A intensidade da variação foi particular para cada fonte e organismo usado. Para as fontes de nitrogênio, algumas delas exerceram efeito inibitório a medida que aumentava a sua concentração no meio de cultivo, chegando a inibir drasticamente o crescimento assim como a secreção de algumas proteínas. O efeito do teor de C e N foi diferente para meios sólidos e líquidos em relação ao perfil de secreção de proteínas. A seguir, as condições de cultura que resultaram em perfis protéicos diferentes e complementares serão escolhidas para obtenção de novas amostras para assim formar um pool a ser submetido a eletroforese bidimensional, seguida de identificação das proteínas presentes por espectrometria de massas.

Palavras-chave: Secretoma, Eletroforese Bidimensional, Proteoma