RESUMO

Herbaspirillum rubrisubalbicans e Herbaspirillum seropedicae são Beta-proteobactérias endofíticas, fixadoras de nitrogênio encontradas em associação com plantas de interesse econômico como milho, sorgo e cana-de-açúcar. Os lipopolissacarídeos (LPS) são estruturas da membrana externa das bactérias gram-negativas, como o Herbaspirillum, e estão geralmente envolvidos na adesão e colonização do hospedeiro. O LPS é formado por três regiões estruturalmente distintas: a porção denominada lipídeo-A, o núcleo oligossacarídico e o antígeno-O. A reação inicial da biossíntese do antígeno-O envolve uma ligação fosfodiéster entre NAcGlc ou Gal ao ácido graxo undecaprenil-PP. Essa molécula serve de suporte inicial para a ligação de NTP-açúcares por glucosiltranferases ancoradas na face citosólica da membrana interna. Após formação de uma unidade oligossacarídica ligada ao Und-PP, a molécula é translocada para a face periplasmática da membrana interna com o auxílio da proteína Wzx (antígeno-O flipase). As unidades oligossacarídicas do antígeno-O são então polimerizadas pela antígeno-O polimerase (Wzy), e o produto é transferido ao lipídeo-A ligado ao oligossacarídeo central pela antígeno-O ligase. O gene waaL de H. rubrisubalbicans codifica para a enzima antígeno-O ligase, responsável pela ligação da porção sacarídica à porção lipídica da molécula de LPS. Este gene foi escolhido para a construção de um mutante visando a verificação de possíveis mudanças na adesão da bactéria à planta. O gene waaL foi amplificado, interrompido por um gene de resistência à kanamicina (Km) e ligado no vetor pSUP202, para posterior transformação em E. Coli e conjugação com H. rubrisubalbicans. A mutação em waaL, que codifica uma enzima específica de biossíntese de LPS, deverá alterar esta molécula e revelar o papel do LPS de H. rubrisubalbicans em sua interação com as plantas associadas.

Palavras-chave: Herbaspirillum rubrisubalbicans, Gene Waal, LPS