RESUMO

A 8-oxo-7,8-dihidro-2'-desoxiguanosina(8-oxodGuo) é um dos produtos provenientes da oxidação do nucleosídeo 2'dexosiguanosina (dGuo), sendo utilizado como biomarcador para quantificar danos provenientes do estresse oxidativo, gerados principalmente por espécies reativas de oxigênio (ROS), entre elas o peróxido de hidrogênio (H2O2) e o oxigênio singlete (1O2). Como a 8-oxodGuo, mesmo disponível comercialmente, possui custo elevado, sua síntese faz-se necessária para estudos. Para testar a realização da síntese foram usados seis tipos diferentes de reações que tinham como princípio a oxidação da dGuo. Na reação I os reagentes utilizados foram dGuo, Fe2+, azul de metileno e O2. A reação II foi composta por dGuo, ácido ascórbico, azul de metileno e O2. As próximas reações testadas tiveram por base os reagentes de Fenton, em que os reagentes da reação III foram dGuo, EDTA, Fe2+, ácido ascórbico e O2e da reação IV dGuo, EDTA, Fe2+, ácido ascórbico e H2O2. Nas últimas reações o íon metálico foi mudado para Cu2+. A reação V foi constituída por dGuo, EDTA, Cu2+, ácido ascórbico e O2 e a reação VI por dGuo, EDTA, Cu2+, ácido ascórbico e H2O2. A detecção da 8-oxodGuo foi realizada por cromatografia líquida de alta performance (HPLC), aparecendo somente nas reações V e VI. Na primeira fase móvel testada o tempo de retenção da dGuo e da 8-oxdGuo foram muito próximos o que dificultaria a purificação, portanto foram testadas novas fases móveis para favorecer a separação adequada. Depois de escolhida a reação, foi realizada a VI em larga escala para obtenção de uma quantidade significativa de 8-oxodGuo, porém quando realizou-se a etapa de purificação foi observado que estava ocorrendo a degradação da 8-oxodGuo. Não se sabe o motivo ao certo, mas a presença do cobre pode interferir, então foi utilizado outro método de purificação sem usar o HPLC para haver retirada do cobre e depois foi purificado por HPLC para separação entre dGuo e 8-oxodGuo. Após sua purificação, a 8-oxodGuo foi liofilizada e armazenada para posteriores usos na investigação de sua oxidação por ROS na presença de glutationa.

Palavras-chave: estresse oxidativo, oxigênio singlete, 8-oxo-7,8-dihidro-2'-desoxiguanosina