RESUMO

O nitrogênio é o nutriente mais abundante na matéria viva, participando na composição de moléculas como ácidos nucleicos, proteínas, carboidratos, entre outras. Bactérias diazotróficas como Rhizobium sp. NGR234 são capazes de converter N2 atmosférico a NH3 através do processo de fixação biológica de nitrogênio. Na maioria das proteobactérias o metabolismo de nitrogênio é controlado pelo sistema NTR. Entre as proteínas que compõem este sistema estão as proteínas NtrB e NtrC, que formam um sistema de dois componentes. A proteína NtrB é uma proteína sensora controlada pelos níveis de amônio intracelular, e a proteína NtrC é um ativador transcricional controlado por NtrB. Quando a disponibilidade de amônio é baixa, a proteína NtrC-P ativa a transcrição de genes envolvidos em vias alternativas para a obtenção de amônio, entre estas a fixação de nitrogênio. Rhizobium sp. NGR234 é uma bactéria diazotrófica, gram-negativa, capaz de estabelecer simbiose com cerca de 112 gêneros de legumes. Neste organismo pouco se conhece sobre o controle do metabolismo de nitrogênio e da fixação que ocorre nos nódulos. O objetivo deste trabalho foi obter uma estirpe mutante com deleção do gene ntrC de Rhizobium sp. NGR234, para possibilitar o estudo da função da proteína NtrC no metabolismo de nitrogênio deste organismo. Para tanto, foram feitas construções para a obtenção de uma estirpe mutante ntrCde NGR234. As regiões inicial e final do gene ntrC foram amplificadas e clonadas no vetor pTZ57. Estes fragmentos foram clivados e ligados ao vetor pUC18 para construir um gene truncado sem alteração na fase de leitura. O gene ntrC truncado (ntrC-Del) foi clonado no vetor pK18mobsacB e esta construção inserida em células de Rhizobium sp. NGR234. As células que sofreram dupla recombinação foram selecionadas em meio contendo sacarose e serão analisadas através da amplificação do gene ntrC por PCR para confirmar a mutação. As estirpes confirmadas como mutantes serão utilizadas para estudar as funções de NtrC em Rhizobium sp. NGR234.

Palavras-chave: Rhizobium sp. NGR234, Gene NtrC, Sistema NTR