ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS ISOLADAS DE PLANTAS DE TRIGO E MILHO NA REGIÃO OESTE DO PARANÁ
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Aluno de Iniciação Científica: Fernanda Freitas de Oliveira (PIBIC/UFPR-TN)
Curso: Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N)
Orientador: Eliane Cristina Gruszka Vendrusculo
Co-Orientador: Marise Fonseca dos Santos
Colaborador: Elisiane Inês Dall'Oglio Chaves (UNIOESTE),
Departamento: Genética
Setor: Campus PalotinaJoel A. C. Abreu, Maiara P. Camargo
Área de Conhecimento: 20202008
RESUMO
A interação de rizobactérias com diversas culturas tem sido tema de pesquisas no mundo todo, devido ao potencial biotecnológico evidenciado no aumento da produtividade das culturas, possibilidade de redução dos custos de produção pela diminuição do uso de adubos nitrogenados, e consequentemente, melhor conservação dos recursos ambientais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar molecularmente bactérias endofítica associadas às raízes de trigo e milho na Região Oeste do Paraná. Plantas de trigo e milho plantadas e coletadas em três áreas de mata com solo: arenoso (A1), latossolo roxo (A2) e hidromórfico (A3). A coleta foi realizada após 60 dias da germinação, e o isolamento ocorreu utilizando-se 7 meios de cultura sólidos DYGS, NFb, JNFb, LG, LGD, LGI e LGI-P. Através dos isolamentos foram obtidos 50 isolados bacterianos, sendo 27 isolados de plantas de trigo: A1 10 isolados (1-DYGS, 2-NFb, 3-JNFb, 1-LG, 2-LGD e 1-LGI); A2 12 isolados (1-NFb, 4-JNFb, 3-LG, 2-LGI e 2-LGI-P) e A3 5 isolados (1-NFb, 2-LG, 1-LGI e 1-LGI-P). Nas plantas de milho foram obtidos 23 isolados: A1 7 isolados (4-JNFb, 1-LGD, 1-LGI e 1-LGI-P); A2 8 isolados (1-NFb, 3-JNFb, 2-LGD e 2-LGI); A3 8 isolados (2-JNFb, 1-NFb, 3-LGI e 2LGI-P). Para a caracterização molecular foram realizadas as extrações de DNA e a amplificação da seqüencia do gene 16S com os primers Y1-Y3. O produto da amplificação foi purificado com enzimas exo/SAP e então realizada a reação de sequenciamento (3500xL Genetic Analyzer). Dos 50 isolados, obtivemos sequências de apenas 14 sendo identificados até o momento os gêneros Agrobacterium, Bacillus, Burkholderia e Rhizobium. Constatou-se alta variabilidade entre os isolados obtidos em todos os parâmetros analisados, confirmando que populações com elevado grau de diversidade morfofisiológica e genética se estabelece endofiticamente com Poaceaes.
Palavras-chave: Bactérias Diazotróficas, Gene 16S, Sequenciamento