RESUMO

Herbaspirillum seropedicae é uma bactéria diazotrófica-associativa, membro da classe Betaproteobacteria, capaz de colonizar epifiticamente e endofiticamente gramíneas de interesse econômico, como milho, arroz e cana-de-açúcar, promovendo o crescimento vegetal. A análise prévia do perfil transcriptômico de H. seropedicae SmR1 durante colonização da rizosfera de milho revelou que os genes Hsero_0317 e Hsero_4580 são superexpressos nas bactérias aderidas à raiz. O primeiro destes genes codifica uma proteína com um domínio de esterase e um domínio alfa-beta hidrolase, e o segundo uma proteína sem função conhecida. Com o objetivo de determinar as funções destes genes na interação planta-bactéria, estirpes mutantes foram construídas. O gene Hsero_0317 foi amplificado por PCR e clonado no plasmídeo pCR2.1, dando origem a pCR2.10317. A interrupção do gene pelo cassete de resistência a canamicina obtido do plasmídio pUC4-KIXX, e a clonagem do gene nocauteado no vetor conjugável pJQ200SK estão em andamento. O gene Hsero_4580 também foi amplificado por PCR, clonado no vetor pTZ57R/T, interrompido pelo cassete de resistência a canamicina, e o gene interrompido foi clonado no vetor conjugável pSUP202. Este plasmídio foi transferido para H. seropedicae por conjugação, mas foram recuperados apenas transconjugantes resultantes de um evento de recombinação. Visando utilizar um sistema de seleção de recombinação mais eficiente, o gene inativado será clonado no vetor pJQ200SK. Após a obtenção, os plasmídios derivados de pJQ200SK serão transferidos por conjugação para H. seropedicae e estirpes resultantes de recombinação dupla serão selecionadas por resistência a canamicina e capacidade de crescimento em sacarose. Estas estirpes mutantes serão utilizadas em ensaios de inoculação de milho. Suporte Financeiro: CNPq/ UFPR, Fundação Araucária; INCT/Fixação Biológica de Nitrogênio/CNPq.

Palavras-chave: Fixação Biológica de Nitrogênio, Herbaspirillum seropedicae, Interação Planta-Bactéria