TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA COM AGROBACTERIUM RHIZOGENES E PARA OBTENÇÃO DE LINHAGENS TRANSFORMADAS E CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA DESSAS LINHAGENS
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Aluno de Iniciação Científica: Joel Antonio Cordeiro de Abreu (Outro)
Curso: Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N)
Orientador: Eliane Cristina Gruszka Vendruscolo
Co-Orientador: Marise Fonseca dos Santos
Departamento: Campus Palotina
Setor: Campus Palotina
Área de Conhecimento: 20200005
RESUMO
Brugmansia suaveolens é uma planta da família das Solanaceae com capacidade de produzir metabólitos secundários da classe dos alcaloides tropânicos, de importância farmacêutica como a hiosciamina e escopolamina. Biofábricas se constituem em processos onde plantas são utilizadas como produtoras de moléculas de interesse industrial. O uso de elicitores tem como finalidade desencadear uma série de reações metabólicas na planta, estimulando a produção de um metabólito de defesa, com a finalidade de obter modelos para biofábricas. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um protocolo de transformação de meristema apical e avaliar o crescimento radicular in vitro, visando o aumento da produção desses alcalóides. Foi avaliada a transformação genética com 4 cepas de Agrobacterium rhizogenes obtidas da EmbrapaCenargen (2659, 1590, R1601 e 8196) usando protocolo de Brasileiro et al. (1998). Para a indução de crescimento de raízes com elicitores, inicialmente, sementes de Brugmansia suaveolens sem tegumento passaram por processo de assepsia e em seguida foram acondicionadas em meio B5 sólido para germinação em sala de cultura de tecidos. Após 60 dias quando as plântulas apresentavam cerca de 4 ramificações de folhas, 0,2g de raízes foram coletadas e acondicionadas em 24 erlenmeyers contendo 30 mL de meio B5 líquido cada um, suplementado com CaCl2 0,1 M e, somente em meio de cultivo B5, considerado o tratamento controle. A massa fresca foi avaliada com 7,14 e 21 dias, totalizando 3 tratamentos com 8 repetições cada. Não houve resposta de transformantes em tecido meristemático de Brugmansia, provavelmente explicado pelo fato das cepas serem curadas e não apresentarem o plasmídio de virulência. Novas cepas estão sendo isoladas no laboratório. Os resultados obtidos com uso de elicitores para crescimento radicular indicaram uma redução na massa das raízes cultivadas nos diferentes períodos avaliados. A média de massa fresca no tratamento controle foi de 0,184g após 7 dias, 0,153g (14 dias) e 0,156g (21 dias), todavia, as diferenças não foram significativas estatisticamente entre os períodos avaliados. A média de massa fresca no tratamento com CaCl2 0,1M foi de 0,123g após 7 dias, 0,144g (14 dias) e 0,137g (21 dias), entretanto, as diferenças não foram significativas estatisticamente entre os períodos avaliados. Quando comparado ao controle, apenas no período de 7 dias as amostras elicitadas com CaCl2 0,1 M apresentaram-se estatisticamente menores. Novas biotécnicas e/ou elicitores deverão ser testados.
Palavras-chave: Transformação Genética, Elicitores, Alcaloides