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Título
UTILIZAÇÃO DE RESÍDUOS AGROINDUSTRIAIS PARA PRODUÇÃO DE ENZIMAS AMILOLÍTICAS POR ASPERGILLUS NÍGER

Aluno: Karen Jaqueline Haselroth - IC-Voluntária - Curso de Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N) - Orientador: Dile Pontarolo Stremel - Departamento de Tecnologia em Biotecnologia - Área de conhecimento: 21202028 - Palavras-chave: atividade enzimática; fatorial fracionário; michaelis menten - Coorientador: Luis Fernando Souza Gomes - Colaborador: Giovane Andrei Kulkamp, Franciele Cristina Xander Laurindo.

Enzimas amilolíticas como a alfa-amilase e amiloglucosidase são importantes biocatalisadores de interesse na agroindústria para conversão de amido, possibilitando em condições moderadas e com pequenas quantidades, conversões significativas de substrato em dextrinas até moléculas menores como a glicose. No presente trabalho, objetivou-se avaliar a atividade destas enzimas para diferentes meios de cultivo com Aspergillus niger ATCC® 10864™ no estado sólido. Os experimentos foram gerados através da aplicação de um delineamento de tratamentos do tipo fatorial fracionário a dois níveis com 10 fatores mais três pontos centrais, totalizando 19 experimentos. O método escolhido visou selecionar os fatores mais importantes e seus efeitos, tendo como variável de resposta a atividade enzimática. Selecionou-se resíduos agroindustriais como soro de leite em pó, melaço, farelo de mandioca e manipueira. Outras substâncias foram utilizadas como complemento nutricional, WPC (concentrado proteico de soro) ZnSO4.7H2O, MgSO4, KH2PO4, CaCO3, e KNO3. Em cada um dos meios inoculou-se uma suspensão na ordem de 9,9. 105 esporos x mL-1 e incubou-se a 30°C, com agitação constante em equipamento Dubnoff por 72 h. Em seguida, o material foi centrifugado e do sobrenadante foi retirado o extrato enzimático, sendo que o mesmo foi utilizado nas devidas analise de atividade enzimática. Para determinação da atividade, 1 mL do sobrenadante foi acrescentado a uma solução de amido solubilizado e tamponado a pH 6,0 e a temperatura de 50oC. A variação na concentração de substrato ao longo do tempo foi medida através da leitura da absorbância a 620nm, onde a curva de calibração foi construída a partir de uma solução de amido PA a 10% (0,2 mL) com 7,3 mL de lugol (KI 30g/l e I2 3g/l) diluído a 10%. Para os 19 ensaios a atividade foi determinada a partir da velocidade máxima, obtida através de um ajuste não linear do modelo cinético integrado de Michaelis-Menten para reator batelada empregando o Solver do Excel®. Os resultados encontrados mostraram que o WPC foi a melhor alternativa como fonte de proteína para a fermentação. Sugere-se que novos procedimentos sejam realizados somente com os fatores que contribuíram para o aumento da atividade enzimática.