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Título
RECUPERAÇÃO, PURIFICAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE ENZIMAS AMILOLÍTICAS DE CULTIVOS EMPREGANDO RESÍDUOS AGROINDUSTRIAIS

Aluno: Franciele Cristina Xander Laurindo - IC-Voluntária - Curso de Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N) - Orientador: Dile Pontarolo Stremel - Departamento de Tecnologia em Biotecnologia - Área de conhecimento: 21202028 - Palavras-chave: eletroforese; aspergillus niger; bradford - Coorientador: Nelson luis Mello Fernandes - Colaborador: Giovane Andrei Kulkamp, karen Ja, Ueline Haselroth, Joseane Aline Siebert.

As enzimas amilolíticas estão entre as mais importantes enzimas industriais, apresentando grande interesse na biotecnologia e em bioprocessos tais como aplicações no setor têxtil, alimentício, farmacêutico e combustível. Dentre as amilolíticas, a mais importante é a a-amilase, pois desempenha um papel fundamental na conversão do amido em produtos de baixo peso molecular, que podem ser utilizados por outras enzimas do mesmo grupo. A sua produção envolve processos fermentativos industriais em meio sólido, semi-sólido ou submerso e requer graus de separação e purificação que vão depender dos custos envolvidos na obtenção final do biocatalisador. Após o processo de fermentação, as operações de forma geral envolvem centrifugação, processos de baixa, alta resolução e tratamentos finais envolvendo secagem ou liofilização. Métodos de análise de proteínas, testes de eletroforese e cromatografias complementam a identificação relacionada aos produtos de interesse. Neste trabalho, procurou-se avaliar a obtenção de enzimas como alfa amilase e  amiloglucosidase  no  cultivo de Aspergillus niger ATCC® 10864 TM  em meio sólido com composições agroindustriais e complementos nutricionais totalizando 19 ensaios com composições diferentes submetidas a 72 horas de fermentação. Amostras foram retiradas e centrifugadas e com o sobrenadante foram submetidas à quantificação de proteína pelo método Bradford, visando estabelecer uma relação entre a atividade e quantidade de catalisador e buscar uma formulação adequada para posterior purificação de formulações a serem otimizadas. A curva para o método foi construída, utilizando-se albumina de soro bovino como padrão, com seis pontos de referências. Posteriormente, selecionando-se os ensaios com melhores atividades enzimáticas, foi realizado testes de eletroforese em gel de policrilamida (PAGE) com objetivo de caracterizar a enzima em relação ao peso molecular e avaliar sua pureza. O gel de eletroforese foi desenvolvido em uma cuba vertical, para separar a amilase dos demais componentes e proteínas presente na amostra. Ensaios com eletroforese foram realizados mostrando a identificação nas amostras das enzimas amilases obtida do processo de fermentação.