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Título
EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DE RAIZ E PARTE AÉREA DE TRIGO (TRITICUM AESTIVIUM L. CV CD 120) CO-CULTIVADA COM A BACTÉRIA HERBASPIRILLUM SEROPEDICAE SMR1 PARA APLICAÇÃO EM ELETROFORESE BIDIMENSIONAL

Aluno: Andressa Estevam - PIBIC/Fundação Araucária - Curso de Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N) - Orientador: Marise Fonseca dos Santos - Departamento de Tecnologia em Biotecnologia - Área de conhecimento: 20800002 - Palavras-chave: proteoma; trigo; eletroforese.

O Trigo cv CD120 uma variedade COODETEC que foi selecionado entre cinco outros por mostrar a capacidade de manter a interação benéfica com Herbaspirillum seropedicae em experimentos in vitro e em casa de vegetação. O objetivo deste trabalho foi prosseguir nos estudo do proteoma desta cultivar de trigo obtida em experimentos in vitro cultivados com H.seropedicae para verificar a expressão diferencial de proteínas de raízes e parte aérea. Com intuito de obter maior massa proteica, maior número de plântulas de trigo foram obtidas de cultura de embriões maduros (Zadok 12) e transferidas para 10 mL de meio MS líquido 1/10 em tubos de ensaio. Após 24 horas, os tubos foram inoculados com 107 células/mL de H.seropedicae e permaneceram durante 7 dias em sala de cultura de tecido vegetal. Como controle, as plântulas não inoculadas seguiram as mesmas condições. Após, as plântulas foram pesadas e divididas em três repetições de 1g de parte aérea e 1g de raízes e estas foram congeladas em N2 liquido. Inicialmente as amostras de parte aérea seguiram para o protocolo de rompimentos de tecido com N2 líquido, retirada de compostos interferentes com TCA 10% em acetona, extração de proteínas usando fenol tamponado e tampão SDS denso pH 8,0 e precipitação de proteínas com acetato de amônio em metanol. Os precipitados foram solubilizados em solução de lise e aplicados na eletroforese bidimensional. A análise de imagem dos géis apresentou pouco ou nenhum spot proteico, quando corados com Coomassie G-250. Então depois de descorados, os géis foram corados com reagente de prata. Feita a análise de imagens utilizando o programa Image Master 2D Platinum v.6, foram em média totalizados 60 spots em alguns géis do controle experimental. Observa-se, portanto que o rendimento na extração de proteínas não foi o esperado, resultando num baixo número de spots. Apesar do aumento de massa de partida a maceração com N2 líquido com ajuda de um gral e pistilo, dependente da ação humana, não obteve na prática aumento de extração de proteínas. Tal observação foi recentemente descrita na literatura.