1074

Título
IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE ESTIRPES DE AEROMONAS

Aluno: Fabrine Rezende Simões - PIBIC/Fundação Araucária - Curso de Farmácia (MT) - Orientador: Cyntia Maria Telles Fadel Picheth - Departamento de Patologia Médica - Área de conhecimento: 40101096 - Palavras-chave: aeromonas; sequenciamento; identificação molecular - Coorientador: Cibelle de Borba Dallagassa.

O gênero Aeromonas compreende bactérias classificadas como bacilos gram-negativos, fermentadores da glucose e citocromo oxidase positivas. Aeromonas são encontradas em meios aquáticos incluindo água potável e água subterrânea, no esgoto, e em muitos alimentos incluindo peixes, crustáceos e moluscos. Algumas espécies de Aeromonas podem causar um amplo espectro de infecções em humanos tais como gastroenterite, septicemia, meningite, infecções em feridas, olhos, articulações e ossos, entre outras. A identificação de Aeromonas ao nível de espécie é difícil e requer a utilização de testes não utilizados na rotina. Além disso, muitas estirpes apresentam reações atípicas o que torna ainda mais complexa a sua identificação. Recentemente métodos moleculares tem sido aplicados para a identificação de Aeromonas, entre eles destaca-se o sequenciamento do gene gyrB que codifica a subunidade B da DNA girase. O objetivo deste trabalho é sequenciar o gene gyrB de 10 estirpes de Aeromonas previamente identificadas ao nível de espécie através de métodos microbiológicos convencionais e comparar os resultados obtidos em ambas as metodologias. As bactérias foram cultivadas em ágar MacConkey por 18 horas a 36ºC, e as colônias utilizadas para a extração de DNA pelo método da fervura. A estratégia utilizada foi amplificar um fragmento de aproximadamente 1100 pb do gene gyrB utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e primers específicos. A amplificação foi confirmada através de eletroforese dos produtos da PCR em gel de agarose a 1% em tampão TBE 1X. Os produtos de PCR foram purificados utilizando as enzimas Exonuclease I e Fosfatase alcalina de camarão (USB) para eliminar os primers e nucleotídeos trifosfatos, e então submetidos à reação de sequenciamento utilizando o kit BigDye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems). Ambas as fitas foram sequenciadas utilizando, individualmente, os mesmos primers empregados para a amplificação de gyrB. Adicionalmente um primer interno foi utilizado para sequenciar a região central do fragmento. Os produtos da reação de sequenciamento foram purificadas e analisadas no Sequenciador Automático de DNA modelo ABI Prism 377 DNA Sequencer (Applied Biosystems) do Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular da UFPR. As sequências de gyrB das 10 estirpes já foram obtidas e estão sendo analisadas.