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Título
BUSCA DE BIOMARCADORES ASSOCIADOS AO DIABETES MELLITUS POR ESPECTROMETRIA DE MASSA DO TIPO MALDI TOF/TOF

Aluno: Débora Rohling Hobold - PIBIC/Fundação Araucária - Curso de Farmácia (MT) - Orientador: Dayane Alberton - Departamento de Patologia Médica - Área de conhecimento: 20801017 - Palavras-chave: diabetes; proteínas; espectrometria de massa - Coorientador: Fabiane Gomes de Moraes Rego - Colaborador: Mauren Isfer Anghebem-Oliveira, Geraldo Picheth, Marcelo Müller dos Santos.

O Diabetes mellitus (DM) é caracterizado por hiperglicemia sanguínea devido à deficiência na síntese, na ação da insulina, ou ambos. O diagnóstico precoce do diabetes, atrelado ao adequado tratamento e monitoramento, permite minimizar e postergar o aparecimento das complicações secundárias, melhorando a qualidade de vida dos afetados e reduzindo os custos do sistema de saúde pública. Portanto, pesquisas envolvendo o estudo de biomarcadores confiáveis para o diagnóstico, tratamento e prognóstico da patologia são de fundamental relevância. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi identificar, por espectrometria de massa, possíveis biomarcadores proteicos e peptídicos associados ao Diabetes mellitus (DM). Como estratégia inicial, dois pools de soro oriundos de 20 indivíduos com DM tipo 2 (pool DM2) e de 10 indivíduos sem diabetes (pool controle) foram empregados neste estudo. Ambos os pools de soro foram submetidos a duas condições de precipitação de proteínas: acetonitrila 50% e sulfito de sódio 21%. Após as precipitações, as proteínas dos sobrenadantes e do precipitado de sulfito foram separadas por eletroforese SDS-PAGE. Posteriormente à corrida eletroforética, os géis foram corados com PhastGel® Blue R e digitalizados. As bandas de proteínas foram quantificadas por densitometria e aquelas diferencialmente expressas entre os indivíduos DM2 e controle foram recortadas do gel e clivadas com tripsina. As massas dos peptídeos trípticos foram determinadas por MALDI TOF/TOF e as proteínas foram identificadas através do programa Mascot. Comparando o perfil protéico do pool controle e DM2, foi possível identificar 3 proteínas diferencialmente expressas: alfa-2-macroglobulina, apoliproteína A-I e a apoliproteína A-IV. A proteína alfa-2-macroglobulina identificada no soro não precipitado e no precipitado do sulfito, estava respectivamente 1,96 e 1,42 vezes mais expressa no pool DM2 em relação ao pool controle. A apolipoproteína A-I foi detectada 1,7 vezes mais expressa no sobrenadante do sulfito oriundo do soro de indivíduos com DM2 e a apolipoproteína A-IV foi detectada no sobrenadante da acetonitrila oriundo do pool controle. O agente precipitante sulfito de sódio foi eficiente na precipitação das globinas, enquanto a acetonitrila precipitou proteínas de elevado peso molecular. Portanto, ambas as condições de precipitação permitiram a identificação da expressão diferencial das proteínas alfa-2-macroglobulina, apoliproteína A-I e a apoliproteína A-IV, as quais são consideradas potenciais biomarcadores para o diabetes mellitus.