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Título
MODULAÇÃO EPIGENÉTICA DOS GENES DAS METALOPROTEASES MMP2 E MMP14 E DO RECEPTOR CD44 PELO FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR (VEGF)

Aluno: Mariana Busato Toledo - Pesquisa voluntária - Curso de Ciências Biológicas (M) - Orientador: Karin Braun Prado - Departamento de Patologia Básica - Área de conhecimento: 20804008 - Palavras-chave: câncer de mama; epigenética; vegf - Coorientador: Giseli Klassen - Colaborador: Andressa Chequin, Isabela Tiemy Pereira.

As células tumorais no câncer de mama apresentam traços moleculares adquiridos em consequência de alterações genéticas e epigenéticas. A epigenética estuda eventos que alteram a expressão de genes sem alterar a sequência de DNA. A metilação do DNA é um dos mecanismos epigenéticos envolvidos no processo de transformação tumoral. As metástases são a principal causa de morte das mulheres com câncer de mama. No processo de disseminação das células tumorais para sítios distantes secundários é necessária a diferenciação de células epiteliais para células mesenquimais. A transição epitelial-mesenquimal (EMT) confere vantagens para a evolução do tumor, desencadeando um processo inflamatório no microambiente tumoral que contribui para proliferação, invasão e metástase. A angiogênese, induzida pelo tumor, decorre da secreção de fatores angiogênicos pelos macrófagos associados ao tumor, entre estes, o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). VEGF interfere na EMT aumentando a expressão de metaloproteases (MMPs) importantes para a degradação de componentes da matriz extracelular. Os genes que codificam as enzimas MMP-2 e MMP-14 apresentam regulação pela metilação do DNA e modificações nas histonas. A glicoproteína CD44 é um marcador presente em células iniciadoras de câncer e o seu gene é regulado através da metilação do DNA. Este estudo objetiva avaliar a ocorrência de regulação epigenética nos genes MMP2, MMP14 e CD44 em linhagens tumorais de mama tratadas com VEGF. Para tanto, foram identificadas as ilhas de CpG e planejado os oligonucleotídeos-iniciadores para o gene CD44 através do programa Methprimer, uma vez que os iniciadores empregados para os genes MMP2 e MMP14 foram previamente padronizados pelo nosso grupo de pesquisa. O cultivo das linhagens celulares tumorais de mama MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-435, MDA-MB-436, PMC-42, SKBR-3 e das linhagens normais de mama HB4a, HB4aC3.6 e HB4aC5.2 foram realizados antes do tratamento com VEGF, seguido de extrações de DNA, por meio da metodologia de fenol/clorofórmio, e de RNA, com o reagente Trizol. O RNA foi testado para estudo de expressão do gene CD44 nas linhagens estudadas. A qualidade da síntese de cDNA foi avaliada por RT-PCR do gene constitutivo GAPDH. A reação de RT-PCR para o gene CD44 mostrou que apenas as linhagens SKBR-3 e HB4aC3.6 não apresentaram expressão de CD44 e, portanto, serão usadas como controle negativo de tratamento com o VEGF. Posteriormente, serão avaliadas a expressão dos genes MMP2, MMP14 e CD44 nas demais linhagens de mama antes e após tratamento dos cultivos celulares com VEGF.