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Título
STUDOS IN VITRO DOS MECANISMOS CELULARES E MOLECULARES ENVOLVIDOS NA DISFUNÇÃO ENDOTELIAL CAUSADA POR PRODUTOS DE GLICOSILAÇÃO AVANÇADA (AGES)

Aluno: Bruna Bosquetti - PIBIC/CNPq - Curso de Farmácia (MT) - Orientador: Andréa Emilia Marques Stighen - Departamento de Patologia Básica - Área de conhecimento: 40000001 - Palavras-chave: doença renal crônica; disfunção endotelial; ages - Colaborador: Lisienny Campoli Tono Rempel, Alessandra Becker-Finco, Maíra Barbosa Reis.

O acúmulo de toxinasurêmicas na corrente circulatória de pacientes com doença renal crônica (DRC) tais como os produtos de glicosilação avançada (AGES) geram uma série de alterações metabólicas e vasculares no organismo, culminando nadisfunção endotelial que, por sua vez, possui papel essencial na patogênese da doençacardiovascular (DCV). Estudos vêm demonstrando que avia PKC-β é uma das principais vias mediadoras deste processo, induzindo uma série demodificações fisiopatológicas nas células. Entre essas modificações está a produção devárias moléculas, tais como a quimiocina monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) e a molécula de adesão vascular adhesion molecule-1 (VCAM-1), responsável pelo recrutamento e adesão de monócitos a parede do vaso nos eventos que precedem a aterosclerose. No presente estudo avaliamos in vitro o papel dos AGES na expressão via PKC-β de MCP-1 por células endoteliais humanas (HUVEC) e monócitos e VCAM-1 por HUVEC. Os AGES foram preparados por glicação da albumina e caracterizados por absorbância e eletroforese em gel de poliacrilamida. As HUVEC foram isoladas de veia de cordão umbilical e caracterizadas pela morfologia celular e citometria de fluxo através da marcação de CD31. Como modelo de monócitos foi utilizada a linhagem comercial U-937. A viabilidade celular foi avaliada pelo método de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). As HUVEC e monócitos foram tratados com AGES a 0,2 mg/mL com ou sem inibidor de PKC-β numa cinética de 3 e 6h ou 0, 12 e 24h. A expressão de MCP-1 e VCAM-1 foi investigada por ELISA em sobrenadante celular após os tratamentos descritos.Não houve diferença significativa na viabilidade celular apos o tratamento com AGES. Quando as HUVEC foram expostas aos AGES, houve aumento significativo (P<0,05) na expressão de MCP-1 após 3 e 6h de forma tempo dependente, quando comparado ao controle. Além disso, quando as HUVEC foram incubadas com AGES e inibidor de PKC-β, foi observado uma diminuição significativa (P<0,005) na expressão de MCP-1, também de uma forma tempo dependente. O mesmo efeito foi observado nos monócitos expostos aos AGES após 6h de incubação (P<0,05), e adição de inibidor de PKC-β (P<0,001). Ainda, quando as HUVEC foram expostas aos AGES, houve um efeito significativo na expressão de VCAM-1 após 24h de incubação, que foi significativamente reduzido (P<0,05), após bloqueio de PKC-β. O presente trabalho demonstra o papel dos AGES na ativação de células endoteliais e monócitos, pela via da via PKC-β, sugerindo um mecanismo para expressão de MCP-1 e VCAM-1.