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Título
ISOLAMENTO IN VITRO DE NEOSPORA CANINUM DO SÊMEN DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS

Aluno: Pedro Irineu Teider Junior - Curso de Medicina Veterinária - Curitiba (MT) - Orientador: Rosangela Locatelli Dittrich - Departamento de Medicina Veterinária - Área de conhecimento: 50503030 - Palavras-chave: isolamento in vitro; sêmen; neospora caninum - Coorientador: Marília de Oliveira Koch - Colaborador: Ana Paula Brenner Busch, Romildo Romualdo Weiss, Luciane Maria Laskoski.

A neosporose é uma doença que ocorre em diversos animais e é causada pelo protozoário Neospora caninum. A prevalência do parasito em cães é elevada, e os principais sinais clínicos são os neurológicos e abortos. O DNA do N. caninum foi detectado no sêmen de bovinos e ovinos, mas até o momento não foi realizada sua pesquisa no sêmen de cães. O objetivo deste estudo foi comprovar a presença e viabilidade de N. caninum no sêmen de cães naturalmente infectados. No estudo foram avaliados 11 cães adultos, clinicamente sadios, provenientes das regiões metropolitana e rural dos estados do Paraná e Santa Catarina. As amostras de sangue foram coletadas sem anticoagulante, para obtenção do soro. A técnica de imunofluorescência indireta (RIFI) foi realizada no soro (cepa NC-1; diluição do soro de 1:50). Na RIFI os resultados foram: seis cães soropositivos para N. caninum e cinco soronegativos. As coletas de sêmen foram realizadas nos 11 cães. Analisou-se a presença do protozoário no sêmen por análise citológica, isolamento in vitro em cultivo de célula Vero e reação da polimerase em cadeia (PCR). Na PCR a região alvo foi a Nc5 para pesquisa de N. caninum, com os primers Np6/Np21. Na análise citológica foram detectadas estruturas sugestivas do protozoário em todas as amostras positivas para N. caninum. No isolamento verificou-se crescimento de parasitos (taquizoítas) em frascos inoculados com amostras de sêmen de dois cães soropositivos. Os isolados foram confirmados pela PCR como N. caninum. Na PCR do sêmen detectou-se presença de DNA de N. caninum em três amostras de sêmen de cães soropositivos. Em uma amostra verificou-se banda na PCR somente no isolado e não no sêmen. Este cão era soronegativo. Foi realizado recoleta de sêmen em três cães soropositivos após 180 dias e nestas amostras não foi encontrado DNA do parasito. Conclui-se que a análise citológica não é uma técnica eficaz na pesquisa de protozoários no sêmen, sendo necessária a multiplicação dos protozoários in vitro e diagnóstico molecular. Em cães clinicamente saudáveis o protozoário Neospora caninum está viável no sêmen, sugerindo a possível transmissão do parasito por via venérea.