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Título
ANÁLISE DE BIOFLUIDOS ATRAVÉS DE DIMS ALIADA A QUIMIOMETRIA NO DIAGNÓSTICO DE INFECÇÃO FÚNGICA

Aluno: Isabela Friebe Zaramella - PIBIC/CNPq - Curso de Farmácia (MT) - Orientador: Francinete Ramos Campos - Departamento de Farmácia - Área de conhecimento: 40300005 - Palavras-chave: aspergilose; espectrometria de massas; quimiometria - Coorientador: Thaís Martins Guimarães de Francisco - Colaborador: Letícia Bonancio Cerqueira, Roberto Pontarolo.

A aspergilose invasiva (AI) é uma infecção oportunista, causada por fungos do gênero Aspergillus, de alta incidência em pacientes imunocomprometidos.  Alguns trabalhos relatam que técnicas convencionais para o diagnóstico desta infecção possuem baixa sensibilidade e especificidade, demorando vários dias até a confirmação do diagnóstico. A espectrometria de massas (EM) por ser uma técnica analítica rápida, sensível e seletiva oferece uma alternativa para o diagnóstico precoce da AI. Ainda, a EM aliada a abordagens quimiométricas pode ser utilizada na diferenciação de perfis metabólicos, o que possibilita a detecção da doença em seus estágios iniciais. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi analisar por EM amostras de soro sanguíneo de pacientes submetidos a transplante de medula óssea para o diagnóstico precoce da infecção fúngica. Para isso, foram analisadas amostras de soro sanguíneo de pacientes imunossuprimidos sem a aspergilose (n=13) e com a aspergilose  (n=14). Alíquotas de 50 µL de amostra foram submetidas ao processo de precipitação de proteínas utilizando acetonitrila contendo 0,1% de CF3COOH.  Em seguida as amostras foram agitadas em vórtex durante 1 min e então centrifugadas a 14000 rpm/4°C/5 min. O sobrenadante foi transferido para um  novo frasco e seco. As amostras foram ressuspensas com 150 µL de uma solução de acetonitrila/água (98:2, v/v) contendo 0,1% de CH2O2 e 1mM de  NH4HCO2. As amostras foram analisadas por infusão direta em um espectrômetro de massas (DIMS) do tipo triplo quadrupolo da Applied  Biosystems API 3200 equipado com uma fonte electrospray (ESI) operando  nos modos positivo e negativo de ionização. Os espectros de massas foram adquiridos na faixa de 50 a 800 Da acumulando 100 ciclos/3 seg. Os dados dos espectros de massas foram submetidos à análise quimiométrica utilizando  análise de componentes principais (PCA) e análise discriminante com método  de mínimos quadrados parciais (PLS-DA). Duas componentes principais (PC1xPC2) foram suficientes para a distinção entre os grupos de amostras de pacientes imunossuprimidos, com e sem aspergilose. As duas componentes representam 86,8% dos dados. Ainda, a PLS-DA resultou em um modelo preditivo eficiente para a presença ou ausência de AI em amostras  desconhecidas, quando se utilizou os espectros obtidos no modo negativo de  ionização. Portanto, a DIMS juntamente com a análise quimiométrica tem sido aplicada com sucesso e pode ser promissora para o diagnóstico rápido de aspergilose.