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Título
ISOLAMENTO E SELEÇÃO DE MICRORGANISMOS PARA A OBTENÇÃO DE VANILINA

Aluno: Daniel Boer Bonifácio - PIBIC/CNPq - Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia (MT) - Orientador: Adriane Bianchi Pedroni Medeiros - Departamento de Engenharia Química - Área de conhecimento: 30600006 - Palavras-chave: vanilina; biotranformação; isolamento - Coorientador: Marcos Vasconcelos.

A vanilina, ou 4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído é o composto químico responsável pelo aroma da baunilha. Embora na indústria química se produza vanilina sintética barata, seria interessante encontrar formas de se produzir vanilina utilizando processos biotecnológicos também a um preço acessível. O objetivo deste projeto é o isolamento de microrganismos, seguido de etapas de screening ou seleção de microrganismos produtores, e por fim processos de evolução dirigida para que as células aumentem a sua capacidade de biotransformar compostos fenólicos como o ácido ferúlico, eugenol ou isoeugenol em vanilina. Na etapa de isolamento utilizaram-se sementes de Cumaru, da árvore Dipteryx odorata, que foram postas em contacto com meio sólido de cultura Ágar Nutriente e Ágar YM durante 48 horas. Por análise macromorfológica foram selecionadas 13 colónias que foram plaqueadas com intuito de obter culturas puras, 10 provenientes do meio Ágar Nutriente e 3 do Ágar YM. A partir de colónias isoladas destas placas, cada uma foi inserida em meio líquido Caldo Nutriente e YM, também durante 48 horas, e realizadas análises microscópicas, após técnica de coloração de Gram. Das 3 placas de YM onde cresceram microrganismos foram identificados 4 colónias diferentes, todas Gram positivas, com características de Streptococcus, uma outra de Coccus, e por fim, outra com dois microrganismos diferentes - 1 bacilo e 1 coco, sendo necessário para este último caso, uma etapa de reisolamento. Nas outras 10 de Caldo nutriente foram encontradas 2 bacilos Gram-negativos, e ainda outras 8 linhagens Gram-positivos, 7 bacilos com características diferentes entre si e 1 coco. Sobre os 2 bacilos Gram-negativos, ainda são necessários testes bioquímicos para confirmação. Na próxima fase do estudo serão realizados testes individuais de resistência a vanilina, ácido ferúlico, eugenol e isoeugenol com um procedimento experimental semelhante ao de antibiogramas, de forma a se obter linhagens naturalmente tolerantes aos compostos aromáticos presentes nas sementes. Numa última fase pretende-se realizar etapas de evolução dirigida, com exposição do microrganismo ao substrato e produto, de forma crescente ao longo do tempo, com exposição eventual a luz UV presente nas câmaras de fluxo por alguns segundos, de forma a acelerar quaisquer tipos de mutações aleatórias, mas sem causar citotoxicidade. O processo em questão já tem sido testado para duas outras espécies de microrganismos disponíveis no nosso laboratório; Amycolaptosis orientalis e Bacillus subtilis.