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Título
DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE E EXPRESSÃO DA TIROSINASE EM CÉLULAS B16-F10 E MELAN- A

Aluno: Tamy Cooper Furusho - PIBIC/Fundação Araucária - Curso de Biomedicina (MT) - Orientador: Glaucia Regina Martinez - Departamento de Bioquímica - Área de conhecimento: 20803001 - Palavras-chave: tirosinase; flavona; melanina - Colaborador: Aline Risson Belinovski.

A melanogênese é um processo bioquímico que sintetiza a melanina e ocorre no interior dos melanócitos. Este pigmento é importante para proteção da pele, pois absorve raios UV. Em excesso este pigmento pode causar problemas estéticos como melasma e manchas de idade. A tirosinase é considerada a enzima limitante da síntese de melanina e está envolvida em duas etapas de sua síntese. Na primeira pela atividade monofenolásica, ocorre a hidroxilação da L-tirosina para L-DOPA, na segunda, pela atividade difenolásica, ocorre a oxidação de L-DOPA a dopaquinona. A flavona (2-fenil-1-benzopiran-4-ona) é a base estrutural comum da família das flavonas, um grupo de flavonoides, substâncias que tem mostrado potencial para aumentar ou diminuir a síntese de melanina. O objetivo do estudo é verificar o efeito da flavona sobre a tirosinase de cogumelo e a tirosinase das células de melanoma B16-F10 para entender seu papel como inibidor da melanogênese observado em cultura de células B16-F10. O ensaio enzimático da tirosinase de cogumelo foi realizado para avaliar os efeitos da flavona (nas concentrações entre 25µM a 800µM) sobre a enzima atráves da leitura de absorbância (470nm) em placas de 96 poços. O ácido kójico, um inibidor da tirosinase, está sendo utilizado como controle das reações (na concentração de 400µM). Os resultados dos ensaios com a tirosinase de cogumelo não mostraram inibição ou estímulo sobre a atividade enzimática. Em estudos anteriores foi observado o efeito estimulante da flavona sobre a tirosinase de células de melanoma B16-F10, efeito não observado sobre a tirosinase de cogumelo. Para confirmar nossa hipótese, está em andamento novos estudos sobre o efeito da flavona sobre a tirosinase de células de melanoma. A metodologia deste experimento com células, que está sendo testada no momento, consiste em cultivar as células de melanoma e lisá-las para extração da enzima e utilizá-las para o ensaio enzimático com a flavona.