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Título
CARACTERIZAÇÃO DE FATORES MOLECULARES DE HERBASPIRILLUM SEROPEDICAE EXPRESSOS DURANTE COLONIZAÇÃO EPIFÍTICA DE RAIZ DE MILHO

Aluno: Marina Saade - PIBIC/Fundação Araucária - Curso de Biomedicina (MT) - Orientador: Emanuel Maltempi de Souza - Departamento de Bioquímica - Área de conhecimento: 20804008 - Palavras-chave: herbaspirillum seropedicae; transcriptoma; raiz de milho - Coorientador: Rose Adele Monteiro - Colaborador: Eduardo Balsanelli.

Herbaspirillum seropedicae é uma Betaproteobacteria endofítica, fixadora de nitrogênio encontrada em associação com plantas de interesse econômico como milho, sorgo e cana-de-açúcar. Os mecanismos moleculares de reconhecimento, colonização e troca de nutrientes entre bactérias diazotróficas e hospedeiros vegetais são pouco conhecidos. Visando entender melhor a interação planta-bactéria, o perfil transcriptômico de H. seropedicae SmR1 durante colonização da rizosfera de milho foi determinado por RNA-seq. As análises deste transcriptoma da rizosfera revelaram variação de expressão de genes possivelmente envolvidos na adaptação de H. seropedicae para rizosfera incluindo quimiotaxia, adesão à superfície radicular e colonização do hospedeiro. A colonização dos tecidos internos das raízes provavelmente envolve a secreção bacteriana de enzimas que degradam a parede celular vegetal, possibilitando a entrada bacteriana. Dentre as várias enzimas genericamente classificadas como hidrolases codificadas por H. seropedicae, sete foram superexpressas pelas células aderidas à raiz de milho. O gene que apresentou maior expressão (110x), Hsero_0317, codifica para uma proteína com um domínio parcial de esterase e um domínio alfa-beta hidrolase. Com o objetivo de determinar a função desta proteína durante a colonização do hospedeiro pela bactéria, uma estirpe mutante para esse gene está sendo construída. Para isso, oligonucleotídeos iniciadores foram sintetizados para amplificar o gene a partir do DNA genômico de H. seropedicae. O amplificado foi clonado no vetor pTZ57R/T, originando a construção pTZ0317, confirmada por sequenciamento. Esse gene será interrompido por um cassete de resistência a canamicina já purificado e, por fim, o gene nocauteado será clonado no vetor conjugável pSUP202. Essa construção será então transferida parava estirpe selvagem, e serão geradas estirpes mutantes por recombinação homóloga. Estas estirpes mutantes serão utilizadas em ensaios de inoculação de milho para verificar a capacidade de adesão e penetração nas raízes.