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Título
AVALIAÇÃO DA PRESENÇA DA PROTEÍNA RECK EM REGIÕES DE MICRODOMÍNIOS DE MEMBRANA RESISTENTES À AÇÃO DE DETERGENTES (DRMS) EM MODELO DE MELANOMA HUMANO

Aluno: Hennrique Taborda Ribas - PIBIC/CNPq - Curso de Farmácia (MT) - Orientador: Sheila Maria Brochado Winnischofer - Departamento de Bioquímica - Área de conhecimento: 20800002 - Palavras-chave: reck; drms; mmps - Colaborador: Thiago Jacomasso.

O melanoma é um tumor originado de células de melanócitos, e se caracteriza pela alta capacidade de sofrer metástase. Esse processo depende de enzimas proteolíticas como as metaloproteinases de matriz (MMPs) que, nesse caso, agem com o objetivo de degradar a matriz extracelular. A proteína supressora de tumor RECK é uma glicoproteína ligada covalentemente a membrana celular por molécula de glicosilfosfatidilinositol (GPI), sendo responsável pela inibição de, pelo menos, três dessas metaloproteinases de matriz: MMP-9, MMP-2 e MT1-MMP. A proteína RECK está normalmente presente em microdominios funcionais de membrana (lipidrafts), local importante para que RECK exerça suas funções. A presença de diversas proteínas nesses lipidrafts mostra-se importante na progressão de melanoma pela evidência de que proteínas estão preferencialmente associadas a membranas resistentes a detergente em diferentes graus de malignidade desses tumores, além de estarem relacionadas à regulação de proteínas do citoesqueleto e pontos de adesão focal. A relação da proteína RECK com essas regiões membranas ainda não está bem esclarecida, portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a presença da proteína em linhagens celulares de melanoma humano com diferentes graus de progressão tumoral. As diferentes linhagens celulares (células de melanoma metastático 1205Lu, células de melanoma de crescimento vertical WM852; e células de melanoma de progressão radial WM35) foram submetidas à extração proteica com uma solução de Trinton X-100 1% a 4ºC por 30 minutos e centrifugadas com gradiente de sacarose, de modo a obter-se diferentes frações celulares. As amostras coletadas foram avaliadas por ensaio de Western Blotting para a detecção das proteínas: RECK, Flotilina (proteína sabidamente presente em regiões de lipidrafts; marcador positivo) e MT1-MMP (uma metaloproteinase de matriz ancorada a membrana). Os resultados obtidos mostram a presença da proteína RECK nos microdomínios funcionais de membrana nas células de melanoma 1205Lu. De forma interessante, a metaloproteinase negativamente regulada por RECK (MT1-MMP) foi detectada nas frações mais densas obtidas dessa linhagem metastática, portanto essa proteína não é localizada nas regiões de microdominios. A correlação da expressão de RECK e MT1-MMP em regiões de lipidrafts e o grau de progressão tumoral em modelo de melanoma humano está sendo estabelecido. A seguir, o conteúdo de lipídeos presente em cada fração de membrana (obtido tanto por espectrometria de massa quanto por espectroscopia de RMN) também será correlacionado.