0110

Título
CONSTRUÇÃO DE MUTANTES H. RUBRISUBALBICANS NO GENE WAAL ENVOLVIDO COM A BIOSSÍNTESE DE LIPOPOLISSACARÍDEOS

Aluno: Gisiane Emanuele Gruber - PIBIC/Fundação Araucária - Curso de Biomedicina (MT) - Orientador: Rose Adele Monteiro - Departamento de Bioquímica - Área de conhecimento: 20804008 - Palavras-chave: herbaspirillum rubrisubalbicans; gene waal; lps - Coorientador: Eduardo Balsanelli - Colaborador: Emanuel Maltempi de Souza.

Herbaspirillum rubrisubalbicans é uma Beta-proteobactéria endofítica, fixadora de nitrogênio encontrada em associação com plantas de interesse econômico como milho, sorgo e cana-de-açúcar, esta associação de Herbaspirillum com gramíneas aparentemente inicia-se com a adesão da bactéria à superfície radicular, seguida de colonização dos pontos de emergência das raízes secundárias e penetração por descontinuidades da epiderme. A parede celular de bactérias gram-negativas é formada pelo peptideoglicano, lipoproteínas, membrana externa e lipopolissacarídeos (LPS). Os lipopolissacarídeos (LPS) estão geralmente envolvidos na adesão e colonização do hospedeiro, estes lipopolissacarídeos são formados por três regiões estruturalmente distintas, sendo elas: Lipídeo-A, o núcleo oligossacarídeo e o antígeno-O. As unidades oligossacarídicas do antígeno-O são polimerizadas pela antígeno-O polimerase (Wzy) este produto é transferido ao lipídeo-A, que está ligado ao oligossacarídeo central, pela antígeno-O ligase (WaaL). Já foi demonstrado por Balsanelli (2013) que a inativação do gene waaL de H. seropedicae causa uma diminuição na colonização endofitica e epifítica, portanto devido a esta descoberta o gene waaL de H. rubrisubalbicans foi escolhido visando a verificação de possíveis mudanças na adesão desta bactéria a planta. O gene WaaL foi amplificado e ligado ao vetor pTZ57R/T, porteriormente foi interrompido por um gene de resistência à kanamicina (Km) e tranformado em Escherichia coli. Os clones contendo o gene mutagenizado serão utilizados para prosseguirmos com a construção da estirpe mutante de H. rubrisubalbicans no gene WaaL. A mutação neste gene, que codifica para uma enzima específica de biossíntese de LPS, deverá alterar esta molécula e revelar o papel do LPS de H. rubrisubalbicans em sua interação com as plantas hospedeiras.