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Título
AVALIAÇÃO DA PRODUÇÃO DE ATP E ADP EM CÉLULAS DE MELANOMA MURINO (B16-F10) SOB CONDIÇÃO DE MELANOGÊNESE ESTIMULADA

Aluno: Aline Risson Belinovski - PIBIC/CNPq - Curso de Biomedicina (MT) - Orientador: Glaucia Regina Martinez - Departamento de Bioquímica - Área de conhecimento: 20803001 - Palavras-chave: melanogênese; metabolismo celular; cromatografia líquida de alta eficiência (clae) - Colaborador: Patrícia da Silva Peres.

Melanoma é um tipo de câncer de pele que se desenvolve nos melanócitos, células responsáveis por produzir melanina, a substância que determina a pigmentação da pele. A melanina é caracterizada por apresentar um efeito ambíguo: absorve a radiação ultravioleta (UV) para proteger o DNA e sequestra espécies reativas de oxigênio, porém, no seu processo de síntese (melanogênese) ocorre a produção de espécies reativas. É sabido que o estímulo da melanogênese diminui a proliferação celular. Sendo assim, o objetivo deste estudo é avaliar a situação metabólica das células de melanoma murino (B16-F10) sob condição de melanogênese estimulada, em comparação com as mesmas células não estimuladas. Para isso, será mensurada a razão entre adenosina difosfato e adenosina trifosfato ([ADP] / [ATP]) por meio da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Foi feito o cultivo das células e o tratamento para estímulo da melanogênese (suplementação do meio de cultura com 0,4mM de L-tirosina e 10mM de NH4Cl), sendo um grupo com duração de estímulo de 24 horas, e outro com duração de 48 horas. As células foram lisadas e processadas a fim de obter um lisado celular com as moléculas de ATP e ADP, o qual foi armazenado em freezer -80ºC até a análise. Foram testadas diversas metodologias de análise, sendo que a mais promissora consiste na utilização de uma coluna C18 (250 x 4.6mm), com detecção UV, fluxo de 1,2 mL/min, fase móvel gradiente de tampão (100 mM de KH2PO4 ajustado ao pH 7 com 3M de KOH e 2mM de tetrabutilamônio hidróxido) e metanol. Com o aprimoramento do método, pretende-se formular uma curva de calibração, para permitir a quantificação dessas moléculas. Espera-se que as células sob estímulo da melanogênese apresentem uma razão de [ADP] / [ATP] maior que as células não estimuladas, indicando aumento da concentração de ADP e/ou diminuição na de ATP, o que ratifica o fato do aumento da síntese de melanina prejudicar o metabolismo e o crescimento celular.