Autor(es) do Trabalho: Andressa Chequin; Anna Caroline Gogola Muller; Mariana Busato Toledo; Karin Braun-Prado.
Nome do Orientador: Karin Braun Prado
Atividade formativa:PVA - Projeto de Voluntariado Acadêmico
Setor de Ciências Biológicas
Curso: Biomedicina (MT)
Área Temática: Saúde
A rinite alérgica é a mais comum de todas as doenças alérgicas, acometendo mais de 400 milhões de pessoas no mundo e é considerada um fator de risco para asma, pois quem rinite tem maiores chances de desenvolvê-la. Na rinite ocorre aumento na expressão de citocinas típicas de linfócitos T-Th2 como IL13 e diminuição das citocinas tipo Th1, como interferon gama, levando ao desenvolvimento de uma resposta inflamatória mediada por imunoglobulina IgE e sintomas como coriza, lacrimejamento e coceira. No Brasil, especialmente no Sul, são observados dois tipos de rinite alérgica: a perene, provocada principalmente por ácaros do gênero Dermatophagoide (Dp) presentes na poeira doméstica, e a sazonal, decorrente do pólen de gramíneas como o Lolium. Fatores ambientais transitórios podem ter efeitos permanentes sobre a regulação de genes por meio de mecanismos epigenéticos, que avalia eventos que alteram a expressão gênica sem alterar a sequência de DNA. A metilação do DNA é, entre o maquinário epigenético, uma importante forma de regular a expressão dos genes envolvidos na diferenciação Th1/Th2. Durante essa diferenciação há diminuição nos níveis de metilação das ilhas CpG de genes, como IL13, durante a polarização para Th2. A análise de metilação global do genoma indicou diferenças em amostras de rinite alérgica e controles sadios, possibilitando extrapolar estes resultados para regiões mais específicas, como as ilhas CpG do gene IL13. O objetivo deste trabalho é verificar o perfil de metilação do gene IL13 em linfócitos TCD4+ efetores de memória e demais células obtidas do sangue periférico de pacientes com rinite e em controles saudáveis. Após isolamento das células T efetoras (kit Miltenyi Biotec), obtenção do DNA dessas células (QIAamp DNA Mini Blood kit) foi verificada a metilação das ilhas CpG 1 e 2 do gene IL13 através da técnica de restrição utilizando-se da endonuclease sensível à metilação (BstUI) e da endonuclease não sensível a metilação (MspI) seguida de uma reação em cadeia da polimerase (PCR) e eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. Neste trabalho foi possível verificar que a ilha 2 de CpG do gene IL13, delimitada pelos iniciadores CD, apresenta-se diferentemente metilada nos pacientes e controles, após restrição enzimática com enzima sensível à metilação BstUI. Entretanto, experimentos adicionais de análise de fragmentos em sequenciador AB3500 (Applied Biosystems) com iniciador C marcado com fluorescência estão em andamento, para identificar os possíveis CGs de IL13 importantes na diferenciação entre controles e pacientes de rinite alérgica.
