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Aluno - Dagna Maria Laurindo da Silva - PIBITI/UFPR-TN - Curso de Tecnologia em Biotecnologia - Palotina (N) - Orientador : Eliane Cristina Gruszka Vendruscolo - Departamento de Tecnologia em Biotecnologia.

Título
TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE BRUGMANSIA SP VIA A. RHIZOGENES PARA A OBTENÇÃO DE NOVAS LINHAGENS E AVALIAÇÃO DA PRODUÇÃO DE ALCALÓIDES

Área de conhecimento: 50103059 - Palavras-chave: transformação; genética; alcalóides - Coorientador: Adriana Fiorini - Colaborador: Eliane Cristina Gruszka Vendruscolo, Adriana Fiorini.

Brugmansia suaveolens(trombeteira)é uma planta com potencial para produção de alcalóides tropânicos utilizados na indústria de fármacos. Estes alcalóides estão mais concentrados nas raízes, por isso, vê-se a indução da produção de tumor de raízes pela Agrobacteriumrhizogenescomo uma grande vantagem na produção comercial desses alcalóides. O objetivo deste trabalho foi isolar A. rhizogenes do solo, utilizando raízes de ervilha e leucena como iscas. Para caracterização bioquímica dos isolados,o teste de 3-ceto lactosee antibiograma (AMC, OXC, ERI, NOR, OXA, AMI, NAL, EST) foi aplicado para todos os isolados. A caracterização molecular por PCR primer específico (região VirG) foi também realizada. Como controle, cepas de A. rhizogenes cedidas pela EMBRAPA(1590, R1601 e 8196) foram utilizadas. A transformação de B. suaveolens foi realizada com as cepas ( 1590 e R1601 ) e o isolado 20, que apresentou melhor resultado para o teste de 3-ceto lactose. Como resultados obtidos, obteve-se 96 isolados a partir de amostras de solo, sendo 17 indicativos de Agrobacterium sp., através do teste de 3-ceto lactose, onde os isolados de Leucena foram mais reativos ao teste. No entanto, nenhuma das amostras apresentou amplificação da região VirG, o que pode indicar a ausência de DNA plasmidial ou que nenhum isolado pertence à espécie de A. rhizogenes. Todas as cepas de A.rhizogenes da EMBRAPA apresentaram um amplicon de 1500pb, correspondente à região VirG. Como relação ao antibiograma, o isolado e as duas cepas da EMBRAPA foram sensíveis a AMI, e somente as cepas 1590 e R1601 foram sensíveis a AMC, OXCe ERI. Os resultados da transformação ainda não foram observados. Após a confirmação da eficiência da transformação, raízes de B.suaveolensserão cultivadas na presença doelicitor CaCl2, visando o aumento da produção de alcalóides posteriormente avaliados por métodos qualitativos e quantitativos.