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Aluno - EVANDRO SANTOS BILEK - IT-Voluntária - Curso de Ciências Biológicas (M) - Orientador : Silvio Marques Zanata - Departamento de Patologia Básica.

Título
OTIMIZAÇÃO DE MÉTODO DE SCREENING DE HIBRIDOMAS PARA OBTENÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS

Área de conhecimento: 21104000 - Palavras-chave: hibridomas; anticorpos; monoclonais.

Anticorpos monoclonais (mAbs) são ferramentas biológicas de grande valia para diagnóstico de doenças, terapias, e pesquisa, tanto para humanos quanto, hoje, para animais de produção. A produção de mAbs é uma atividade que demanda alto investimento, esforço e mão de obra especializada, motivos pelos quais é realizada, no Brasil, principalmente dentro da Academia. Neste panorama, uma iniciativa empreendedora entre professores e alunos da UFPR criou a Imunova Análises Biológicas, uma empresa incubada na universidade, que tem por objetivo oferecer produtos e serviços à sociedade, na área de saúde animal. Dentre os produtos em desenvolvimento estão os anticorpos monoclonais.O presente trabalho está sendo realizado em parceria com a Imunova, e tem por objetivo otimizar a etapa de screening dos mAbs produzidos. A etapa de screening é o momento em que os hibridomas produtores de anticorpos são testados contra o antígeno de interesse e selecionados segundo a especificidade e a força de interação mAb-antígeno. Em concreto, a problemática abordada é não reconhecimento pelos mAb das porções glicosiladas das proteínas-alvo, o que ocorre porque a proteína imobilizada nas placas de screening é produzida por tecnologia recombinante em Escherichia coli, que não dispõe de maquinaria intracelular para glicosilação.O proposto neste trabalho é a utilização de proteínas recombinantes produzidas por células eucarióticas HEK293 para o screening por ELISA. Por serem eucarióticas, processarão as glicosilações de maneira mais próxima à devida. A proteína em uso é o homólogo ao receptor de superfície de linfócitos T CD28 de Gallus gallus (galinha). Por ser uma proteína com peptídeo de endereçamento à membrana externa, o processo inicial será imobilizar células inteiras como antígeno para o ELISA, ou whole cell ELISA. Portanto, o presente trabalho objetiva estabelecer um método adequado para o screening de hibridomas produtores de anticorpos monoclonais, através da imobilização de proteínas glicosiladas em placas de 96 poços. Até o momento, foram realizados ensaios imobilizando células inteiras expressando CD28, e a ligação antígeno-anticorpo foi medida por ELISA. Os resultados não demonstraram eficácia da técnica. O problema principal foi identificado e está sendo resolvido.