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Aluno - Alyssa Akari Goto - PIBITI/CNPq - Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia (MT) - Orientador : Chirlei Glienke - Departamento de Genética.

Título
DESENVOLVIMENTO DE AGROTRANSFORMAÇÃO DE ENDÓFITOS EXPRESSANDO O GENE REPÓRTER DSRED E ENSAIOS DE CONTROLE BIOLÓGICO DE PHYLLOSTICTA CITRICARPA

Área de conhecimento: 20202008 - Palavras-chave: queda prematura dos citros; citros; colletrichum - Coorientador: Camila da Costa Senkiv.

O Brasil é um dos maiores exportadores de laranja, sendo responsável por 25% da produção mundial, com safras de 47.010 toneladas/ano. Neste contexto, a mancha preta do citros na casca da laranja é uma doença que impede que os frutos sejam exportados, prejudicando assim a economia nacional. O presente trabalho visa contribuir com os estudos de interação do agente causal desta doença, o fungo Phyllosticta citricarpa, com a planta de citros, visando o entendimento do patossistema e estratégias de controle biológico. Para o estudo da interação planta-patógeno e controle biológico utilizou-se a estratégia de linhagens contendo genes repórteres que expressam proteínas fluorescentes. Portanto, o objetivo deste trabalho foi obter, selecionar, caracterizar e manter linhagens transformadas com vetores contendo os genes verde fluorescente (GFP) e vermelho fluorescente (DsRed), dos fungos Phyllosticta citricarpa e P. capitalensis (utilizado como controle). A manutenção das linhagens consistiu no repique das linhagens de P. citricarpa e P. capitalensis transformadas e das suas respectivas linhagens selvagens em meio BDA pH 5,8 e estufa a 28ºC.Os transformantes foram obtidos utilizando Agrobacterium tumefasciens. Foi realizada também a avaliação da velocidade de crescimento micelial das linhagens transformadas em relação às selvagens, comparando 2 linhagens transformadas de P. citricarpa e 1 de P. capitalensis. O diâmetro de crescimento foi medido a cada 5 dias, durante 30 dias. As medições foram tabuladas e comparou-se a taxa de crescimento das linhagens. As taxas de crescimento das transformadas de P. citricarpa foram semelhantes entre si, mas maiores que a da linhagem selvagem. Já a transformada de P. capitalensis cresceu a um ritmo semelhante à da selvagem. Conclui-se que a transformação de P. capitalensis não alterou sua velocidade de crescimento e tal linhagem pode ser utilizada em experimentos futuros. Por outro lado, em P. citricarpa há a possibilidade do T-DNA utilizado na transformação ter sido inserido em uma região do genoma envolvida ao crescimento micelial. Desta forma, tais transformantes não podem ser utilizados nos experimentos de estudo da interação com a planta, uma vez que tal relação pode ser influenciada pelo evento de transformação. Por outro lado, estas linhagens mutadas podem ser utilizadas para estudos de genes de patogenicidade buscando localizar e sequenciar a região onde o T-DNA foi inserido. O experimento será realizado novamente com os mesmos procedimentos, porém utilizando outras linhagens transformadas de P. citricarpa.