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Aluno - Tania Dahiana Ruiz das Neves - PIBITI/UFPR-TN - Curso de Ciências Biológicas (M) - Orientador : Marcelo Müller dos Santos - Departamento de Bioquímica.
Título
CLONAGEM, EXPRESSÃO E DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE DAS PROTEÍNAS DO SISTEMA DE FOSFOTRANSFERASES DE HERBASPIRILLUM SEROPEDICAE
Área de conhecimento: 20804008 - Palavras-chave: herbaspirillum seropedicae; fosfotransferases; matabolismo de carbono e nitrogênio - Coorientador: Lucas Zanon Monteiro.
Herbaspirillum seropedicae é uma bactéria endofítica, fixadora de nitrogênio e promotora do crescimento de plantas. Além disso, H. seropedicae produz alguns produtos de interesse biotecnológico como polihidroxibutirato, exopolissacarídeos e ácido indolacético. Essas características tornam esta bactéria um alvo potencial para engenharia metabólica, com o intuito de aplicá-la como inoculante de gramíneas de interesse econômico, tais como, arroz, milho e trigo, bem como em outros processos biotecnológicos. Através da análise do sequenciamento genômico de Herbaspirillum seropedicae, foram localizados genes do sistema de fosfotransferases (PTS - do inglês phosphotransferase system). Este sistema desempenha um papel central na integração dos metabolismos de carbono e nitrogênio em procariotos. Dos genes identificados em H. seropedicae,três deles são homólogos a genes PTS-Ntr de outras bactérias (ptsP - EINtr, ptsO - NPr, ptsN - EIIANtr). Também foi localizado o gene ptsM que expressa uma proteína putativa EIIA tipo-manose (que regula o transporte de manose) e hprK que codifica uma enzima bifuncional quinase/fosfatase que atua na regulação de PTS via fosforilação/defosforilação de PtsO. As permeases EIIB e EIIC que atuam no transporte de carboidratos e, que normalmente são encontradas no sistema PTS de enterobactérias não foram encontradas em H. seropedicae, indicando que o sistema PTS em H. seropedicae tenha um papel preponderantemente regulatório. Portanto, a caracterização do funcionamento deste sistema é fundamental para descrevermos em maiores detalhes o metabolismo de H. seropedicae e a sua regulação. Os cinco genes do sistema PTS em H. seropedicae foram amplificados e clonados em vetor pTZ18R digerido com SmaI. Os genes estão sendo confirmados através de sequenciamento de DNA e serão posteriormente subclonados no vetor pET28a. A purificação das proteínas do sistema PTS de H. seropedicae e o estabelecimento do ensaio de atividade fosforilase in vitro permitirá uma melhor caracterização deste sistema em bactérias diazotróficas, sendo que os resultados a serem obtidos neste projeto poderão nos auxiliar a desenhar estratégias de engenharia metabólica que sejam eficientes para ampliar a capacidade de fixação de nitrogênio e da obtenção de produtos de interesse biotecnológico