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Aluno - Bruno Afonso Ramos Cassilha - PIBITI/CNPq - Curso de Ciências Biológicas (M) - Orientador : Rose Adele Monteiro - Departamento de Bioquímica.

Título
BIOPROSPECÇÃO DE ENZIMAS E OUTROS COMPOSTOS DE INTERESSE BIOTECNOLÓGICO A PARTIR DE BIBLIOTECAS METAGENÔMICAS

Área de conhecimento: 20804008 - Palavras-chave: enzimas; metagenônica; bioprospecção - Coorientador: Helisson Faoro - Colaborador: Emanuel Maltempi de Souza.

Estima-se que em 1g de solo existam mais de 10 bilhões de microorganismos e em torno de 10 mil espécies diferentes de bactérias, que em grande maioria são desconhecidas por não se conseguir cultivá-las nos meios tradicionais usados no laboratório. O advento da Metagenômica possibilitou a análise do DNA dessas bactérias sem precisar cultivá-las, acarretando na descoberta de novas enzimas e biocatalisadores, como lipases. As Lipases são enzimas do tipo carboxilesterases que catalisam a hidrólise de acilgliceróis de cadeia longa, elas tem diversos usos na indústria e por isso há uma demanda para a identificação e caracterização de novas lípases com um maior valor biotecnológico e econômico. Portanto o objetivo geral deste trabalho é identificar uma nova lípase verdadeira a partir da biblioteca metagenômica proveniente de solo contaminado com gordura animal advindo de uma estação de tratamento de efluentes. Para isso foi usada a biblioteca SCGA e foi realizada uma triagem utilizando três meios de cultura contendo: tributirina, tricaprilina ou trioleína, para diferenciar esterases de lipases (esterases não conseguem quebrar trioleína, pois esse composto apresenta uma cadeia carbônica com mais de 10 átomos de carbono). Nessa triagem foram selecionados 11 clones que apresentaram atividade (halo de hidrólise) em todos os meios testados. Esses clones foram coletados, armazenados, sequenciados e tiveram o DNA fosmidial purificado. Os fosmídeos provenientes desses clones foram nebulizados, tiveram suas pontas reparadas e os fragmentos foram separados em gel de agarose 0.7%. Os fragmentos obtidos, em torno de 3kb ou mais, foram extraídos do gel e ligados ao vetor pUC 19, e o plasmídeo resultante foi transformado em Escherichia coli estirpe TOP 10. Os clones obtidos estão sendo analisados buscando aqueles cujo plasmideo apresente genes que codifiquem para as lípases verdadeiras identificadas nos fosmídeos da biblioteca metagenômica.