Aluno de Iniciação Científica: IZABEL VOLKWEIS ZADINELO (PIBIC/CNPq)
Curso: Tecnologia em Biotecnologia - Palotina
Orientador: ELIANE CRISTINA GRUSZKA VENDRUSCOLO
Co-Orientador: MARISE FONSECA DOS SANTOS
Colaborador: MAIARA PASUCH DE CAMARGO
Departamento: Campus Palotina
Setor: Campus Palotina
Palavras-chave: Brugmansia suaveolens , cultura de raízes , alcalóides tropânicos
Área de Conhecimento: 50103059 - MELHORAMENTO VEGETAL

Brugmansia suaveolens é uma planta medicinal pertencente à família das solanaceae que produz metabólitos secundários da classe dos alcalóides com grande importância para a indústria farmacêutica. A produção do alcalóide é tecido-específico, sendo as raízes o principal sítio de produção do alcalóide. Nas duas últimas décadas tem havido considerável interesse na produção destes compostos por culturas de raízes em escala industrial. O objetivo deste trabalho foi estabelecer protocolo de crescimento radicular in vitro, extrair e caracterizar os alcalóides tropânicos. Sementes de B.suaveolens foram germinadas e plântulas com aproximadamente 30 dias tiveram suas raízes cortadas em segmentos de 2 cm. Estes segmentos foram inoculadas em meio B5 líquido suplementado com concentrações de 0, 1, 2, 4, 8 e 16 mg.L-1 de 2,4 D, AIA e ácido giberélico, totalizando 16 tratamentos, com 3 repetições cada. Foram avaliadas o crescimento radicular (peso fresco) aos  0, 7, 14 e 21 dias de cultivo e em peso seco (g). A extração dos alcalóides ocorreu ao final dos 21 dias. As amostras das raízes foram maceradas e extraídas com ácido sulfúrico 2% por 2 horas. Após centrifugar á 12000g/8min o sobrenadante foi alcalinizado com hidróxido de amônio. Clorofórmio foi adicionado ao sobrenadante, e na fração orgânica separada foram concentrados os alcalóides extraídos. Após completa evaporação do clorofórmio, os alcalóides foram dissolvidos em ácido sulfúrico 2%. Padrões de escopolamina, atropina e hiosciamina foram obtidos da mesma forma a partir de medicamentos comerciais. A cromatografia para caracterização dos alcalóides foi realizada em placa fina (Thin Layer Chromatography - TLC) de sílica usando como fase móvel CHCl3: MeOH: NH4OH (50: 9: 1 v/v/v) em um volume de 150 ml. As amostras dos diferentes tratamentos foram aplicadas separadamente. Após a corrida cromatográfica a bandas foram reveladas com o reagente de Bouchardt (Iodo/Iodeto de potássio/H2O. Os resultados mostraram que não houve diferença estatística quanto às massas obtidas entre os tratamentos. Todas as amostras revelaram bandas para presença de alcalóides, porém de pequena intensidade com mesmo índice de retenção (Rf) dos padrões empregados. Apenas nos tratamentos com 1 e 4 mg.L-1 de AIA foram observadas manchas com alta intensidade e com Rf da hiosciamina. Tais resultados apontam para uma possível indução do AIA no aumento da produção da hiosciamina.

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