ESTUDO DA DIVERSIDADE GENÉTICA DE BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS ASSOCIADAS AS RAÍZES DE TRIGO E MILHO EM ÁREAS DE MATA NATIVA NA REGIÃO OESTE DO PARANÁ

Aluno de Iniciação Científica: Fernanda Freitas de Oliveira (PIBIC/Fundação Araucária)
Curso: Tecnologia em Biotecnologia - Palotina
Orientador: Eliane Cristina Gruszka Vendruscolo
Co-Orientador: Marise Fonseca dos Santos
Colaborador: Elisiane Inês Dall'Oglio Chaves , Joel A. C. Abreu
Departamento: Campus Palotina
Setor: Campus Palotina
Palavras-chave: Bactérias diazotróficas , trigo , milho
Área de Conhecimento: 21200009 - MICROBIOLOGIA

As bactérias endofíticas constituem um amplo grupo de microrganismos, que associados as plantas representam um enorme potencial a ser explorado, por contribuírem beneficamente com o crescimento de várias espécies vegetais. O objetivo do presente trabalho foi verificar a diversidade bacteriana endofítica associadas às raízes de plantas de trigo e milho em três áreas de mata nativa na Região Oeste do Paraná. As plantas foram coletas de três áreas de solo: arenoso (A1), latossolo roxo (A2) e hidromórfico (A3). O isolamento foi realizado após 60 dias da germinação, no LABIOGEN da Universidade Federal do Paraná – Campus Palotina, utilizando-se 7 meios de cultura sólidos DIGS, NFb, JNFb, LG, LGD, LGI e LGI-P, com diferentes diluições seriadas. Através dos isolamentos foram obtidos 46 bactérias, sendo 17 de plantas de trigo: A1 – 6 isolados (1-DIGS; 1-JNFb, 1-LG, 2-LGD, 1-LGI-P); A2 – 10 isolados (1-NFb, 1-JNFb, 2-LG, 3-LGD, 1-LGI, 2-LGI-P) e A3 – 1 isolado do meio LG. Nas plantas de milho foram obtidos 29 isolados: A1 – 16 isolados (3-DIGS; 1-NFb, 5-JNFb, 2-LG, 4-LGD, 1-LGI-P); A2 – 7 isolados (1-DIGS; 3-JNFb, 1-LG, 1-LGD, 1-LGI-P) e A3 – 6 isolados (2-DIGS; 1-NFb, 2-JNFb, 1-LGD).Os 46 clones de rDNA 16 S selecionados para este trabalho, foram amplificados com os primers Y1-Y3. Os produtos de PCR foram digeridos com enzimas de restrição Hinf I, Hae III e RSa I. Os fragmentos de DNA digeridos foram separados por eletroforese (gel de agarose a 2%), visualizados em luz UV e fotografados. Para análise estatística e agrupamentos foi utilizado o programa UPGMA do pacote estatístico GENES (Cruz, 2001). Como resultados obtidos, os produtos clivados geraram fragmentos de tamanho variado entre 1 e 7, 6.7% dos clones apresentaram padrão de banda único e 94.3% dos clones apresentaram clones contendo sequências polimórficas em diferentes frequências na amostra analisada. Também, foi possível observar de 1500 pb a 100 pb fragmentos por enzima de restrição, com 23 perfis para a enzima Hinf I, 20 para Hae III e 16 para RSa I. A combinação dos padrões de restrição permitiu a distinção de 20 haplótipos, não havendo relação entre a origem dos isolamentos. Contudo, avaliando individualmente os perfis das enzimas, foi possível observar alguns perfis exclusivos e alguns comuns em relação à origem das linhagens bacterianas. As próximas etapas do trabalho serão aumentar o número de enzimas de restrição e identificar as linhagens por meio do sequenciamento do gene do 16S rRNA de acordo com o padrão de clivagem.

 

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