DESENVOLVIMENTO DE UM TESTE DE DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL PARA ACIDENTES CAUSADOS COM A ARANHA-MARROM LOXOSCELES INTERMEDIA, USANDO ANTICORPOS RECOMBINANTES

Aluno de Iniciação Científica: SABRINA KARIM SILVA (PIBIC/UFPR-TN)
Curso: Enfermagem
Orientador: Larissa Magalhães Alvarenga
Co-Orientador: Juliana Ferreira de Moura
Colaborador: Juliani Ramada, Alessandra Becker Finco, Aline Zorzetto
Departamento: Patologia Básica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Loxosceles sp. , anticorpos monoclonais , imunoensaios
Área de Conhecimento: 21101000 - IMUNOQUÍMICA

Loxoscelismo são lesões cutâneas necróticas degenerativas e/ou falha da função renal e distúrbios hematológicos provocados por acidentes com aranhas do gênero Loxosceles, popularmente conhecidas como "aranha marrom". Quando existe suspeita de acidente por Loxosceles é realizada a administração do soro antiloxoscélico, que deve ser feito nas primeiras 72 horas, pois, após esse período, a eficácia da soroterapia é reduzida. A equipe de saúde enfrenta dificuldades em identificar precocemente o loxoscelismo, porque não há testes específicos para a identificação das toxinas no sangue dos pacientes acidentados. O objetivo desse trabalho, portanto, é caracterizar anticorpos específicos contra venenos Loxocélicos, como ferramentas capazes de identificar componentes presentes no veneno de aranhas do gênero Loxoceles. Para isso anticorpos policlonais e um anticorpo monoclonal, o mAb12, foram empregados em ensaios de imunoprecipitação e ELISA. O mAb 12, previamente preparado pelo grupo, foi purificado por imunoafinidade em Sepharose-Proteína-A. Já os anticorpos policlonais específicos foram obtidos, a partir de soro eqüino anti-loxosceles fornecido pelo CPPI, por cromatografia de imunoafinidade, na qual foi imobilizado veneno de L. intermédia (Li) em CNBr-Sepharose. Foi produzido um conjugado anti-L.intermedia-HRP pela ligação dos anticorpos policlonais específicos para Li à peroxidase, e utilizados no teste de ELISA. Resultados mostraram que o mAb 12 e os anticorpos equinos policlonais anti-L.intermedia reconhecem proteínas das três espécies principais de Loxosceles encontradas no Paraná (L. intermedia, L. gaucho e L. laeta) nos diferentes imunoensaios empregados. O passo seguinte será a avaliação do ELISA sanduíche produzido com as amostras dos pacientes acidentados com as aranhas do gênero Loxosceles. Os resultados obtidos nesse trabalho irão auxiliar na produção futura de um teste diagnóstico para loxoscelismo.

 

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