PURIFICAÇÃO E DESENVOLVIMENTO DE FORMULAÇÃO SÓLIDA CONTENDO FITASES PRODUZIDA POR FERMENTAÇÃO A PARTIR DE UM NOVO MICRORGANISMO 1

Aluno de Iniciação Científica: Larissa Staack (PIBIC/CNPq)
Curso: Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Orientador: Michele Rigon Spier
Co-Orientador: Carlos Ricardo Soccol
Colaborador: Priscila Zanette de Souza, Denise Salmon, Silvana Alban
Departamento: Engenharia Química
Setor: Tecnologia
Palavras-chave: Fitase , Ganoderma , Purificação
Área de Conhecimento: 20805004 - ENZIMOLOGIA

Fitases (EC 3.1.3) são enzimas que catalisam a hidrólise de fitatos em fosfatos inorgânicos e derivados fosfatados de mio-inositol. O fitato é considerado a principal forma orgânica de armazenamento de fósforos nas plantas e apresenta ação antinutricional, por ser um forte quelante de minerais essenciais (como cálcio, magnésio, ferro e zinco) e por reduzir a biodisponibilidade de algumas proteínas. Além disso, os animais monogástricos não são capazes de digerir essa forma orgânica de fósforo. Portanto, a adição de fitases na ração animal visa aumentar a biodisponibilidade de nutrientes, minerais e reduzir a excreção de nutrientes não absorvidos. Visando dar continuidade aos estudos que forneçam mais informações a respeito da estrutura das fitases produzidas pelo macromiceto Ganoderma applanatum, foram realizados processos de concentração e purificação parcial do extrato bruto contendo fitases. O extrato enzimático foi obtido através de fermentação no estado sólido durante 96 horas, tendo farelo de trigo como substrato e suporte, seguida de maceração, filtração e centrifugação a 4500 rpm / 4ºC / 15 minutos. A concentração e purificação parcial do extrato se deu por micro e ultrafiltrações, utilizando o QuixStand (GE, Suécia), um sistema de filtração tangencial. Para a microfiltração utilizou-se cartucho com poros de 0,2 µm, e para a ultrafiltração foram utilizados cartuchos com poros de 10 e 300 kDa. As frações obtidas pelas filtrações foram submetidas à dosagem de atividade de fitase (Heinonen e Lahti, 1981 modificada por Spier et al., 2010), à análise de proteínas (Bradford, 1976) e à análise do perfil protéico através de SDS-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida e dodecilsulfato de sódio), utilizando o sistema Mini-Protean Tetra Cell (Bio-Rad). Mantendo mais de 70% da atividade inicial, a ultrafiltração com cartucho de 300 kDa se mostrou eficaz na separação de proteínas presentes no extrato enzimático. Através de SDS-PAGE, e considerando que fração entre 10 e 300 kDa foi a que apresentou maior atividade de fitase, foi possível estimar o tamanho molecular da fitase de G. applanatum e o perfil protéico obtido pelo fungo. Através da ultrafiltração com cartucho de 10 kDa, foi possível concentrar a enzima e mantê-la ativa.

 

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