Aluno de Iniciação Científica: Vanessa Kessler Chicora (CNPq-Balcão)
Curso: Ciências Biológicas
Orientador: Liu Un Rigo
Co-Orientador: Leonardo Magalhães Cruz
Colaborador: Maria Isabel Stets, Emanuel M. de Souza, Fábio de Oliveira Pedrosa
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Herbaspirillum , Diazotrófico , Inoculação em planta
Área de Conhecimento: 20804008 - BIOLOGIA MOLECULAR

O gênero Herbaspirillum é principalmente conhecido por conter bactérias diazotróficas capazes de assimilar nitrogênio atmosférico através de um processo denominado Fixação Biológica de Nitrogênio. No entanto, o gênero inclui também bactérias que não fixam nitrogênio e que apresentam grande diversidade fisiológica (ex., fixação de carbono, degradação de compostos fenólicos, produção de fitormônios, etc.). Algumas das bactérias diazotróficas podem se associar a plantas e auxiliar o hospedeiro agindo como bactérias promotoras do crescimento vegetal. Atualmente o gênero Herbaspirillum possui 13 espécies descritas, isoladas de diferentes ambientes (endofítico, rizosfera, água e solo) e localizações geográficas (Brasil, Europa, Coréia, Japão e Ilhas Canárias). Neste estudo, foram realizados ensaios de inoculação de algumas espécies do gênero em planta de arroz (Oryza sativa) e foram analisadas as capacidades de colonização epifítica e endofítica dos microorganismos testados na planta. Foram testadas as espécies H. seropedicae, H. rubrisubalbicans, H. huttiense, H. chlorophenolicum, H. autotrophicum e H. rhizosphaerae. Das seis espécies, três (H. seropedicae, H. rubrisubalbicans e H. huttiense) exibiram ambos os tipos de colonização (epifítica e endofítica). H. autotrophicum e H. rhizosphaerae apresentaram apenas colonização epifítica e H. chlorophenolicum não apresentou nenhum tipo de colonização. Desta maneira, destacou-se interesse pela colonização endofítica apresentada por H. huttiense, uma espécie isolada de água destilada. Decidiu-se então usar esta espécie para novos ensaios de associação com arroz. Inicialmente, o gene 16S rRNA foi amplificado e sequenciado a partir das bactérias reisoladas das plantas para confirmação da identidade taxonômica e submetidas a análises de espectrometria de massa MALDI-TOF, para confirmação do perfil espectrométrico. Para visualização in situ da colonização do tecido vegetal pela bactéria, a marcação de H. huttiense com o gene repórter gfp foi realizada por transferência por eletroporação do plasmídio pHRGFPGUS, mantido em E. coli S17. A marcação foi confirmada pela visualização das células em microscopia de fluorescência utilizando fotomicroscópio Jenaval Zeiss MF-AKS (Carl Zeiss Jena, Germany) e permitirá confirmar o padrão de colonização em plantas de arroz.

 

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