Aluno de Iniciação Científica: Marina Soneghett Cotta (CNPq-Balcão)
Curso: Ciências Biológicas
Orientador: Fábio de Oliveira Pedrosa
Co-Orientador: Leonardo Magalhães Cruz
Colaborador: Giovana de Souza Magnani, Arnaldo Glogauer, Helisson Faoro
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: nifH , 16S rRNA , diversidade
Área de Conhecimento: 20804008 - BIOLOGIA MOLECULAR

O grupo de procariotos apresenta uma grande diversidade, algumas estimativas sugerem que existem entre 100.000 e 1.000.000 de espécies, mas atualmente apenas cerca de 7.000 espécies de Arquéia e Bactéria são conhecidas. Esta diferença se deve principalmente às espécies descritas serem cultivadas, pois estes organismos são minoria na natureza. Porém, nas últimas décadas este quadro vem sendo revertido, utilizando uma abordagem independente de cultivo. A diversidade de comunidades microbianas pode ser estudada a partir da extração do DNA diretamente do ambiente, amplificação, clonagem e sequenciamento de genes marcadores. O presente trabalho tem como objetivo analisar e comparar a diversidade total de bactérias e arquéias e a diversidade de organismos fixadores de nitrogênio em um solo degradado, utilizando a análise de sequências dos genes 16S rRNA (com primers seletivos para bactéria e arquéia) e nifH, respectivamente. O DNA utilizado para amplificar fragmentos do gene nifH e 16S rRNA foi extraído de maneira indireta do sedimento de uma estação de tratamento de efluentes de uma indústria de processamento de carnes. Foram obtidos fragmentos do tamanho desejado na amplificação dos genes. Os produtos de PCR dos genes 16S rRNA (bactéria) e nifH foram clonados em vetor pCR2.1 e o DNA plasmidial foi extraído e sequenciado. Um total de 99 sequências do gene nifH foi obtido e comparado com o banco de dados públicos, utilizando o programa BLASTx. Os fragmentos sequenciados compartilham alto grau de similaridade com sequências do gene nifH de Alphaproteobacteria (2%), Betaproteobacteria (15,2%), Gammaproteobacteria (59,6%), Deltaproteobacteria (1%) Firmicutes (1%) e organismos não cultivados (21,2%). Os resultados sugerem que a família Enterobacteriaceae, pertencente à classe Gammaproteobacteria é o grupo dominante nesta comunidade diazotrófica. Análises de 158 sequências de 16S rRNA revelaram a presença dos seguintes taxa: Firmicutes (47,5%), Bacteroidetes (34,2%), Proteobacteria (13,9%) e bactérias não classificadas (4,4%). Na biblioteca do gene 16S rRNA foram encontrados  17 gêneros e na do nifH 12, e apenas um destes gêneros é comum às duas bibliotecas. Estes resultados indicam que os organismos que predominam na biblioteca do gene 16S rRNA são diferentes dos que predominam na biblioteca do gene nifH. Também é possível inferir que os fixadores de nitrogênio não parecem constituir um grupo predominante neste ambiente, pois não estão representados na biblioteca do gene 16S rRNA, provavelmente devido à riqueza do solo em compostos nitrogenados.

0379