Aluno de Iniciação Científica: Andressa Valerio (PIBIC/CNPq)
Curso: Farmácia
Orientador: Glaucia Regina Martinez
Colaborador: Amanda Armstrong Lemes, Paulo Roberto Worfel e Patrícia da Silva Peres
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: oxigênio singlete , captação química , fotossensibilização
Área de Conhecimento: 20803001 - METABOLISMO E BIOENERGÉTICA

A Terapia Fotodinâmica (PDT) tem sido estudada como um tratamento para diversos tipos de tumores, em especial, para o câncer de pele. O efeito citotóxico desse tratamento está relacionado à produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Entre as possíveis ROS geradas, destaca-se a formação do oxigênio singlete (1O2), que é muito reativo. Um fotossensibilizador com propriedades favoráveis para tratamento fotodinâmico é o corante Rosa Bengala (RB) que, sob condições apropriadas, gera apenas o 1O2. Considerando que o melanoma é um câncer de pele com baixa resposta ao PDT usando outros fotossensibilizadores, o objetivo desse trabalho foi tentar entender como as células respondem ao tratamento de fotossensibilização do RB pela avaliação da quantidade de ¹O2 formado e pela quantificação de citocromo c liberado como parâmetro de apoptose em células de melanoma murino B16-F10 e em melanócitos murinos Melan-a. O tratamento das células foi feito pela incubação com RB 0,5 mM e irradiação com luz acima de 550 nm por 10 min. O monitoramento da produção de ¹O2 foi realizado pela utilização do método de captação química pelo composto álcool furfurílico (FFA) 2 mM nas condições de irradiação por 5, 10 e 15 min na presença de RB 0,5; 1 e 5 mM. A detecção do FFA, assim como a do citocromo c liberado nas células após o tratamento foi feita por análises de HPLC. Com relação à detecção do citocromo c, obteve-se muita variação dos resultados dentro de um mesmo grupo de amostras indicando que alguma etapa do protocolo deve ser responsável pela variabilidade, indicando assim que uma revisão das etapas deverá ser feita para melhorar a reprodutibilidade do método. As análises de HPLC do FFA mostraram que este composto apresenta um tempo de retenção de 4,7 min e seus produtos de oxidação após reação com ¹O2 foram evidenciados como um único pico com tempo de retenção de 3,9 min. A quantificação do consumo do FFA pela análise das áreas dos cromatogramas mostrou que em 15 min de irradiação 15, 18 e 25% do FFA era consumido usando 0,5; 1 e 5 mM de RB, respectivamente. Para a irradiação com 1 mM de RB por 90 min, o consumo do FFA chegou a 70%. A formação do produto foi crescente ao longo do tempo de irradiação. Esses resultados indicam que o sistema apresenta uma eficiência boa de geração de ¹O2 e que nas condições usadas nas células foi possível estimar que cerca de 0,4 mM de ¹O2 pode ser gerado. Esse dado será de grande importância na interpretação dos resultados utilizando esse sistema de irradiação.

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