Aluno de Iniciação Científica: Marina Gomes Sobral (PIBIC/CNPq)
Curso: Farmácia
Orientador: Cyntia Maria Telles Fadel Picheth
Co-Orientador: Emanuel Maltempi de Souza
Colaborador: Cristina Beatriz Aroca Ribeiro, Carolina Lumi Tanaka, Cibelle de Borba Dalagassa
Departamento: Patologia Médica
Setor: Ciências da Saúde
Palavras-chave: Escherichia coli , proteoma , sal biliar
Área de Conhecimento: 20802005 - BIOQUÍMICA DOS MICROORGANISMOS

Escherichia coli é parte da microbiota intestinal, entretanto algumas estirpes podem causar infecções em humanos. As estirpes de E. coli  podem ser isoladas em meios de cultura seletivos contendo o agente inibidor desoxicolato de sódio (DCS), um sal biliar, mas a resposta da bactéria a esse agente não é bem compreendida. O objetivo deste trabalho foi utilizar a análise proteômica, empregando a eletroforese bidimensional (2D), para comparar o padrão de proteínas expressas (proteoma) por E. coli ATCC 25922 cultivada em caldo LB, na ausência e na presença de 2,5mM de DCS. As culturas foram incubadas em estufa estacionária a 37°C até atingir a densidade ótica de 0.02 em 600nm. Os extratos protéicos de culturas realizadas em três períodos distintos foram preparados de acordo com o protocolo descrito no manual 2D-Electrophoresis (GE Healthcare). A quantificação de proteínas foi realizada através do método de Bradford. Quatrocentos microgramas dos extratos foram aplicados em tiras de 13 cm com gradiente de pH imobilizado na faixa de pH de 4 a 7 (GE Healthcare) e após a isoeletrofocalização (1ª. dimensão) foi realizada a separação protéica em SDS-PAGE (2ª. dimensão). Os géis foram corados com PhastGel Blue R, digitalizados e analisados com o programa ImageMaster 2D Platinum. Foram detectadas aproximadamente 300 bandas protéicas nos géis 2D da condição controle (sem DCS) e teste, com predomínio de proteínas com ponto isoelétrico (pI) na faixa de pH entre 5 e 7 em ambas as condições. Para comparar os géis, os parâmetros selecionados no programa ImageMaster 2D Platinum foram  report > 2 e teste t com valor de p < 0,05. Nessas condições não foi observada diferença no número das proteínas expressas em ambas as condições. No entanto, foi detectado um aumento, estatisticamente significativo, de aproximadamente 4 vezes na expressão de uma banda proteica com massa de 11000 Da e pI de 6,05 na presença de DCS. A banda foi retirada do gel, analisada por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF-TOF e os resultados comparados com o banco de dados Swissprot, levando à identificação da proteína Cold Shock Protein A (CspA). Essa proteína foi originalmente associada com o estresse ao choque ao frio. Entretanto é expressa em baixos níveis durante condições normais de crescimento e tem a sua expressão induzida sob outras condições de estresse como, por exemplo, no dano à membrana pelo tolueno. Os resultados deste trabalho sugerem que CspA também participa na resposta ao estresse provocado pelo DCS.

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