Aluno de Iniciação Científica: Francini Myszynski (PIBIC/CNPq)
Curso: Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Orientador: Fábio de Oliveira Pedrosa
Co-Orientador: Rose Adele Monteiro
Colaborador: Eduardo Balsanelli, Leda Satie Chubatsu, Emanuel Maltempi de Souza
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Herbaspirillum rubrisubalbicans , LPS , rfbB
Área de Conhecimento: 20802005 - BIOQUÍMICA DOS MICROORGANISMOS

O Herbaspirillum rubrisubalbicans eo Herbaspirillum seropedicae são bactérias endofíticas, fixadoras de nitrogênio encontradas em associação com plantas de interesse econômico como milho, sorgo e cana-de-açúcar. Os lipopolissacarídeos (LPS) são estruturas da membrana externa das bactérias gram-negativas, como o H. rubrisubalbicans e o H.seropedicae, e estão geralmente envolvidos na adesão e colonização do hospedeiro. A estirpe mutante de H. seropedicae SmR1 no gene rfbB, possui um LPS diferente da estirpe selvagem e teve a sua capacidade de aderir e colonizar endofiticamente raizes de milho diminuída, indicando o envolvimento de LPS neste processo. O produto do gene rfbB participa da síntese de dTDP-rhamnose que pode ser importante para a síntese de LPS. Com o objetivo de verificar se o gene rfbB de H. rubrisubalbicans M1 também está envolvido com a estrutura do LPS uma estirpe mutante no gene rfbB foi construída. O gene rfbB foi amplificado, interrompido por um gene de resistência à kanamicina (Km) e uma estirpe mutante foi obtida por recombinação homóloga e confirmada por PCR. Esta estirpe mutante apresentou um perfil eletroforético de LPS semelhante ao da estirpe selvagem, e o padrão de adesão e colonização endofítica de raízes de milho foi, também, semelhante aos da estirpe selvagem. Esses resultados sugerem que o produto do gene rfbB de H. rubrisubalbicans não está envolvido na síntese de LPS. Em vista deste resultado o gene waaL de H.rubrisubalbicans, que codifica para a enzima antígeno-O polimerase, que está envolvido na ligação do antígeno-O ao LPS, foi escolhido para a construção de um novo mutante. O gene waaL foi amplificado do DNA genômico bacteriano utilizando primers específicos e o produto de amplificação foi ligado ao vetor pTZ57R/T. Em seguida, o inserto contendo o gene foi interrompido pela inserção de um cassete de kanamicina (Km). As demais etapas necessárias para a obtenção da estirpe mutante no gene waaL estão sendo realizadas. Este mutante deverá permitir revelar o papel do LPS de H. rubrisubalbicans em sua interação com as plantas associadas.

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