0347 Aluno de Iniciação Científica: Rafaela da SIlva Ramos (PIBIC/CNPq)
Curso: Ciências Biológicas
Orientador: Leda Satie Chubatsu
Co-Orientador: Helisson Faoro
Colaborador: Kharina Midori Trindade, Valter A. Baura, Fabio S. Nunes, Emanuel M. de Souza, Cyntia M. Fadel-Picheth, Rose A. Monteiro, Luciano F. Huergo, Leonardo
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: metagenômica , bioprosecção , composto marrom
Área de Conhecimento: 20800002 - BIOQUÍMICA

A maior parte da diversidade microbiana presente no solo permanece desconhecida por não ser possível seu cultivo utilizando meios de cultura convencionais. Neste aspecto, a metagenômica permite o acesso diretamente ao DNA da microbiota ambiental sem a necessidade do cultivo. DNA de amostras de solo da Floresta Atlântica Paranaense foram utilizadas para a construção de bibliotecas metagenômicas utilizando fosmídeos mantidos em Escherichia coli. Durante um procedimento de triagem da biblioteca metagenômica, utilizando meio contendo 1% de tributirina, foi observado um clone (MAF1125F06) que produzia um composto marrom. Este clone foi isolado para análise, o DNA fosmidial foi purificado, nebulizado e fragmentos de 3 a 8 kb foram ligados em vetor pUC19 , originando a sub-biblioteca F06-3kb contendo 288 clones. Todos os clones tiveram seus plasmídeos purificados e utilizados para sequenciamento de DNA em larga escala a partir das extremidades, através dos iniciadores universal e reverso. A partir de 576 leituras de DNA foram gerados 5 sequências contínuas(contigs). Através de análises bioinformáticas utilizando o pacote de programas Phred-Phrap-Consed, verificou-se que o clone MAF1125F06 possui um inserto em torno de 27 kb, que codifica para 32 prováveis proteinas (ORFS). A fim de preencher as lacunas não cobertas pelo sequenciamento, foram escolhidos 4 clones para reação de inserção de  transposon. O sequenciamento desses clones está em andamento. A análise de sequência indicou que o clone MAF1125F06 apresenta genes que codificam para enzimas relacionadas ao metabolismo da tirosina: fumarilacetoacetase e homogentisato 1-2, dioxigenase. Esses dados juntamente com análise por espectroscopia de infravermelho sugerem que o composto marrom corresponde a piomelanina, um polímero derivado de benzoquinona acetato, um produto de oxidação do homogentisato.

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