Aluno de Iniciação Científica: Ayane Furtado de Medeiros Alves de Azevedo (Bolsista permanência)
Curso: Química
Orientador: Elaine Machado Benelli
Colaborador: Cecília Fabiana da Gama Ferreira
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Glnk , AFM , ESTRUTURA
Área de Conhecimento: 20800002 - BIOQUÍMICA

Diante da crescente pesquisa referente à estrutura de macromoléculas, é de grande interesse o estudo de diferentes métodos que permitam a determinação de estrutura de macromoléculas, destacando-se as proteinase a análise por Microscopia de Força Atômoca-MFA.  A proteína Gln B é uma proteína globular, envolvida na regulação de atividade das proteínas relacionadas com a utilização de fontes alternativas de fixação de nitrogênio em muitas bactérias, incluindo a Herbaspirillium seropedicae, e é um homotrímero de 36kDa. Neste trabalho são apresentados resultados iniciais referente à análise de imagens de Microscópio de Força Atômica,em modo dinâmico, de superfícies de mica e vidro com 5 diferentes tipos de soluções tampão adsorvidas,ditas imagens padrão. Para tanto foi produzida célula competente BL 21-AI, seguida de internalização do plasmídeo Gln B HS-PET na célula competente, conseqüente crescimento em placa de Petri, e a purificação da proteína em coluna de Heparina. Foi realizada a quantificação das proteínas por meio do método Bradford. E como era de conhecimento as concentrações das proteínas, foram realizadas diluições das amostras com as soluções tampão respectivas. As proteínas diluídas são depositadas, por drop deposition, nas superfícies de mica e vidro, e então seriam analisadas por Microscopia de Força Atômica. Para que seja feita uma interpretação correta das imagens de MFA das amostras é necessário fazer medidas dos padrões. Deste modo, as imagens são interpretadas a partir de comparações entre o comportamento das imagens das amostras e as imagens dos padrões.  Como foram feitas imagens somente dos padrões,que são o controle para as imagens das amostras, foram obtidas informações sobre o comportamento e estruturas dos componentes das soluções tampão. E como os tampões trabalhavam num pequeno gradiente de pH, seria possível também estudar o comportamento da proteína frente à variação do pH. Este método pode ser empregado para diferentes proteínas,e macromoléculas, desde que seja feito um estudo detalhado das soluções tampão em que a proteína esteja, ou do meio em que a macromolécula estudada esteja sendo trabalhada. 

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