Aluno de Iniciação Científica: Eduardo Soares Constantino Lopes (PIBIC/CNPq)
Curso: Farmácia
Orientador: Andrea Senff Ribeiro
Co-Orientador: Silvio Sanches Veiga
Colaborador: Fernando Hitomi Matsubara
Departamento: Biologia Celular
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Loxosceles , veneno , notina
Área de Conhecimento: 20601000 - CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR

O veneno das aranhas do gênero Loxosceles é constituído por uma complexa mistura de compostos biologicamente ativos, com a predominância de moléculas de baixa massa molecular (3-45 kDa). Entre as toxinas já identificadas estão os peptídeos da família das notinas (“knottins”). Esses peptídeos são constituídos de uma única cadeia, com massa molecular de 3 a 10 kDa e elevado número de resíduos de cisteínas, que estabelecem pontes dissulfeto intramoleculares. O arranjo estabelecido por essas pontes dissulfeto gera uma espécie de nó na estrutura desses peptídeos, o que caracteriza o grupo.  Análises transcriptômicas da glândula de veneno de L. intermedia revelaram que os transcritos referentes a estes peptídeos foram os mais abundantes, representando aproximadamente 53% de todas as sequências obtidas relativas a toxinas. Grande parte das notinas de venenos de aranha já caracterizadas apresentam atividade sobre canais iônicos presentes no sistema nervoso de insetos, causando paralisia ou morte. Este estudo teve por objetivo a obtenção de um peptídeo da família das notinas presente no veneno da aranha-marrom, em sua forma recombinante, por meio de expressão heteróloga, bem como sua caracterização funcional e produção de soro hiperimune específico. Bactérias da cepa E. coli AD494(DE3) foram transformadas com a construção previamente obtida, composta pelo vetor de expressão pET-14b e cDNA correspondente à notina em estudo. Os parâmetros ótimos de expressão do peptídeo recombinante foram 0,5 mM do indutor IPTG, por 4 horas, a 30°C. A purificação do peptídeo ocorreu por meio de cromatografia de afinidade em resina de Ni-NTA. Soro hiperimune específico para o peptídeo foi produzido em coelhos e foi capaz de reconhecer especificamente tanto o peptídeo recombinante purificado quanto o peptídeo em sua forma nativa presente no veneno. Ensaios de atividade inseticida preliminares in vivo utilizando grilos (Gryllus sp.) não foram capazes de evidenciar ação estatisticamente significativa em relação aos controles utilizados. Esse resultado pode estar associado a múltiplos fatores, entre eles, o uso de modelo procariótico de expressão, pois não favorece modificações pós-traducionais. Dessa forma, o estabelecimento correto das pontes dissulfeto e o dobramento do peptídeo são prejudicados. Novos ensaios estão sendo realizados, uma vez que a obtenção deste peptídeo de forma solúvel e ativa é fundamental para sua avaliação como bioferramenta para aplicação biotecnológica, bem como irá contribuir com a elucidação dos efeitos clínicos causados pelo veneno de L. intermedia.

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