ANÁLISE PROTEÔMICA COMPARATIVA DE TECIDO MAMÁRIO TUMORAL E NÃO TUMORAL
Aluno de Iniciação Científica: Talita Helen Bombardelli Gomig (PIBIC/CNPq)
Curso: Ciências Biológicas
Orientador: Enilze Maria de Souza Fonseca Ribeiro
Co-Orientador: Iglenir João Cavalli
Colaborador: Gustavo Góes da Costa
Departamento: Genética
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: genes , proteínas , câncer de mama
Área de Conhecimento: 20205007 - GENÉTICA HUMANA E MÉDICA
O carcinoma mamário é o segundo tipo de neoplasia mais frequente no mundo, representando 22% dos casos novos a cada ano. Dados do Instituto Nacional de Câncer estimam incidência de 52.680 novos casos de câncer de mama para os anos de 2011 e 2012, com um risco estimado de 52 casos a cada 100 mil mulheres. A tumorigênese mamária é de etiologia complexa, com diversos fatores contribuindo para conferir malignidade. Diferentes proteínas podem estar envolvidas neste processo, resultando em funções celulares distintas devido a sua expressão diferencial. Nesse contexto, a abordagem proteômica, torna-se uma importante ferramenta para a análise do perfil protéico expresso em estágios distintos da progressão tumoral, uma vez que, dentre suas aplicações, a proteômica permite a caracterização do conjunto de proteínas produzido pelo genoma sob determinadas condições fisiológicas. O objetivo deste estudo consiste na análise proteômica comparativa entre amostras pareadas de tecido proveniente de carcinomas primários (tumoral) e fora da margem cirúrgica (não tumoral), através das metodologias de eletroforese bidimensional (2D-PAGE) e espectrometria de massa (MALDI-ToF). Para o presente estudo, foram utilizadas três amostras pareadas. Os extratos protéicos foram obtidos a partir de 400mg de amostra, utilizando os procedimentos das lises química (reagentes) e mecânica (triturador elétrico). A concentração de proteínas foi mensurada pelo método de Bradford. Para a primeira dimensão, foi realizada a isoeletrofocalização com tiras de IPG (immobilized pH gel) na faixa de pH de 4-7, previamente reidratadas em solução de tampão e amostra. A segunda dimensão foi realizada através da eletroforese em gel de poliacrilamida a 10% na presença de SDS (SDS-PAGE). Posteriormente, os géis bidimensionais foram corados em solução de coomassie coloidal. Para cada amostra foram confeccionados géis em triplicata. Estes foram digitalizados pelo equipamento ImageScanner™ II e a análise das imagens foi realizada pelo software ImageMaster ™ 2D Platinum v6.0. A identificação protéica será realizada por espectrometria de massa (MALDI-TOF), com posterior comparação do padrão de massa obtido (PMF – peptide mass fingerprinting) com bancos de dados públicos.