Aluno de Iniciação Científica: Micheli Pecharki (PIBIC/Fundação Araucária)
Curso: Ciências Biológicas
Orientador: Ricardo Lehtonen Rodrigues de Souza
Colaborador: Dellyana Rodrigues Boberg, Meire Silva Batistela
Departamento: Genética
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: RAPH1 , câncer de mama esporádico , PCR em tempo real
Área de Conhecimento: 20205007 - GENÉTICA HUMANA E MÉDICA
O câncer constitui um conjunto de mais de cem doenças caracterizadas pelo crescimento desordenado das células, que podem invadir outros tecidos e órgãos, formando metástases. Falhas nos mecanismos que controlam o crescimento e a proliferação celulares são responsáveis pelo desenvolvimento do estado canceroso. Diversos genes que codificam proteínas do citoesqueleto e das vias de sinalização para a proliferação celular tem sido alvo de pesquisas. O gene RAPH1 (Ras association and pleckstrin homology domains 1), codifica a proteína Lamelipodina humana (Lpd), integrante de uma família de proteínas que funcionam como adaptadores de sinais para modular, através das proteínas Ena/VASP, a montagem do citoesqueleto de actina, essencial para muitos movimentos celulares. Recentes trabalhos relataram que a expressão do gene RAPH1 estava alterada, em pacientes de cânceres de mama e ovário, quando comparadas ao tecido normal. O presente estudo tem como objetivo analisar a expressão deste gene em amostras de tumor de mama esporádico comparando com a expressão em tecido mamário não tumoral. Além do gene alvo RAPH1, outros três genes ACTB, PUM1 e 18S foram utilizados como controles endógenos. As amostras de RNA de ambos os tecidos, cedidas pelo Laboratório de Citogenética Humana e Oncogenética da UFPR, foram extraídas pelo kit RNeasyâ(QIAGEN), convertidas em cDNA pela Reação de Retrotranscrição (High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits, Applied Biosystems) e posteriormente armazenadas em freezer. Os genes foram amplificados por PCR em Tempo Real (qPCR) utilizando sondas Taqman como método de detecção (Taqman gene expression assay Applied Biosystems). A análise da expressão relativa do gene RAPH1 será feita usando o método do 2-??Ct, com o auxílio do software DataAssist™ Software v3.01 (Life Technologies Corporation). Testes de correlação e regressão entre os dados de expressão e os histopatológicos de cada paciente serão realizados a fim de investigar a influência de uma possível alteração no padrão de expressão do gene RAPH1 no processo de tumorigênese bem como no agravamento dessa doença.
