Aluno de Iniciação Científica: Carolina Mathias (PIBIC/CNPq)
Curso: Ciências Biológicas
Orientador: Iglenir João Cavalli
Co-Orientador: Enilze Maria de Souza Fonseca Ribeiro
Departamento: Genética
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Proteômica , Câncer de Mama , Linfonodo Metastático
Área de Conhecimento: 20205007 - GENÉTICA HUMANA E MÉDICA

O câncer de mama é considerado o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo e de acordo com a estimativa do Instituto Nacional do Câncer para 2012 a incidência será de 52.680 novos casos e 12.852 o número de mortes no Brasil. A carcinogênese é um processo caracterizado por várias etapas que alteram a constituição genética e epigenética das células mamárias e pode progredir de duas maneiras: doença in situ ou invasiva. Apesar da ocorrência de vários estudos relacionados à carcinogênese mamária, pouco ainda é conhecido em relação à sua etiologia molecular. A Proteômica é um método que tem como objetivo descrever o conjunto de proteínas expressas por um genoma, tecido ou células em determinada condição fisiológica. Assim, se institui como uma importante ferramenta tanto para a elucidação dos eventos iniciais da carcinogênese como para a determinação de marcadores moleculares para detecção de metástases. O presente trabalho tem como objetivo a análise comparativa de proteínas presentes em tumores mamários primários e em linfonodos axilares com presença de células metastáticas utilizando o método de eletroforese bidimensional (2D-PAGE) seguida de espectrometria de massa (Maldi-ToF). O estudo está sendo realizado com três amostras pareadas de tumor primário e linfonodo metastático proveniente de pacientes submetidas à cirurgia nos hospitais Nossa Senhora das Graças e de Clínicas, após assinatura de consentimento livre e esclarecido. Primeiramente foram obtidos extratos protéicos a partir de 400mg do material biológico. Em seguida mediu-se a concentração de proteínas das amostras de acordo com o Método de Bradford (BRADFORD, 1976). A primeira etapa da eletroforese bidimensional consiste na Focalização Isoelétrica em que há a separação proteica de acordo com o pH das mesmas utilizando-se tiras específicas que apresentam variação de pH de 4-7. A corrida em gel de poliacrilamida permite a separação das proteínas de acordo com a sua massa. Esta é realizada na presença de SDS (SDS-PAGE) utilizando o sistema eletroforético Hoefer SE 600 Ruby (GE Healthcare). A coloração utilizada para os géis foi o Coomassie coloidal. As imagens foram digitalizadas utilizando o equipamento ImageScannerTM II (GE Healthcare) e analisadas com auxilio do software ImageMasterTM 2D Platinum v6.0 (GE Healthcare). Em uma próxima etapa, os pontos no gel que representam proteínas de interesse serão removidos, desidratados e digeridos com tripsina para análise por Espectrometria de Massa.

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