Aluno de Iniciação Científica: Claudia Andreia Skowronski (CNPq-Balcão)
Curso: Farmácia
Orientador: Emanuel Maltempi de Souza
Colaborador: Rose Adele Monteiro, Marco Aurelio Schuler de Oliveira, Fabio de Oliveira Pedrosa.
Departamento: Bioquímica
Setor: Ciências Biológicas
Palavras-chave: Herbaspirillum seropedicae , Sistema Ntr , GlnK
Área de Conhecimento: 20202008 - GENÉTICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOS

Herbaspirilum seropedicae é uma ß-Proteobacteria capaz de colonizar os tecidos internos de plantas com interesse econômico, como milho, trigo, arroz e cana de açúcar. H. seropedicae é considerada uma bactéria diazotrófica, ou seja, é capaz de reduzir o nitrogênio atmosférico a amônio, tornando-o disponível para outros organismos, como a planta hospedeira. A capacidade de fixação de nitrogênio, além da produção de fitohormônios, fazem de H. seropedicae uma bactéria com potencial para ser utilizada como promotora do crescimento vegetal. O metabolismo de nitrogênio em Proteobacteria é regulado pelo sistema Ntr, que controla a transcrição de genes relacionados com a utilização de diferentes fontes de nitrogênio. As proteínas PII (GlnB e GlnK) tem um papel central nesse sistema. A regulacão exercida por GlnB e GlnK no sistema Ntr está relacionada com a capacidade dessas proteínas interagirem com outras proteínas alvo e regular a atividade das mesmas. Para isso, as proteínas PII processam e transmitem sinais de nitrogênio, carbono e energia para as proteínas alvo envolvidas no metabolismo celular. O objetivo deste trabalho é identificar proteínas de H. seropedicae capazes de interagir com a proteína GlnK de H. seropedicae purificada. Para isto, em um primeiro ensaio, a proteína GlnK fusionada com uma cauda de histidinas foi ligada a pérolas magnéticas carregadas com Ni+2. Um extrato de proteínas totais de H. seropedicae foi aplicado à resina magnética na presença ou ausência da proteína GlnK e, após sedimentação da resina, os complexos protéicos foram eluídos. Tendo em vista, a quantidade de proteínas inespecificas que se ligaram a resina, foi necessário a realização de um segundo ensaio mais especifico por interação em coluna cromatográfica. Um extrato de proteínas totais de H. seropedicae foi aplicado à coluna cromatográfica na presença ou ausência da proteína GlnK. Os complexos protéicos foram eluídos e analisados por SDS-PAGE. Estas proteínas serão identificadas por espectrometria de massa MALDI-TOF.

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