Área de Conhecimento: 20802005 - BIOQUÍMICA DOS MICROORGANISMOS
Os microorganismos (fungos e bactérias) constituem a base da Biotecnologia, sejam como fornecedores de produtos naturais ou atuando diretamente em bioprocessos e, mais recentemente, como fornecedores de material genético. Durante muito tempo os micro-organismos foram explorados com base no cultivo e isolamento de culturas puras. Muitos biocatalisadores e produtos de aplicação farmacológica foram obtidos desse modo. No entanto, apenas uma pequena parcela das espécies bacterianas pode ser cultivada pelos métodos tradicionais usados em laboratório. A Metagenômica é descrita como a análise funcional e de sequência de genomas microbianos coletivos contidos em uma amostra ambiental de modo independente de cultivo. Desse modo é possível identificar genes que codifiquem enzimas mais eficientes ou que apresentem características especiais, como termoestabilidade, enantioselividade, regioseletividade, atividade em solventes orgânicos e também enzimas de vias metabólicas que levem a produção de novos produtos naturais com aplicação farmacológica. Durante a prospecção de uma biblioteca metagenômica construída a partir de amostras de solo contaminado com gordura, foi identificado um clone produtor de pigmento amarelo denominado CA1. O objetivo desse trabalho é o sequenciamento do inserto de DNA metagenômico do clone CA1. O fosmídeo (pCC2FOS) do clone CA1 foi purificado pelo método de lise alcalina e posteriormente fragmentado por nebulização. O produto da nebulização foi separado por eletroforese de baixo ponto de fusão. Posteriormente os fragmentos de 3 kb, 5 kb, e 8 kb foram purificados do gel e clonados no vetor pUC19. Para realização da clonagem o vetor pUC19 foi digerido com a enzima SmaI em diferentes tempos obtendo-se um tempo ótimo de tratamento de 30 minutos. O vetor pUC19 digerido também foi purificado a partir da eletroforese de baixo ponto de fusão. Os plasmídeos recombinantes foram eletroporados na estirpe DH10b de Escherichia coli e cultivados em meio LB-ágar contendo ampicilina 250 mg/ml. Para cada banda de inserto de DNA purificado do gel foram obtidos cerca de 50 clones. foram obtidos cerca de 50 clones de cada inserto. A confirmação da clonagem dos insetos de DNA e o sequenciamento esta em andamento.
